单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,浆膜腔积液细胞学检查,主要内容,浆膜腔积液概述,浆膜腔积液的采集、申请单的填写,浆膜腔积液脱落细胞的分类及意义,免疫组化染色,浆膜腔积液概述,浆膜衬在体腔壁和转折包于内脏器官表面的薄膜,浆膜壁层贴于体腔壁表面的部分,浆膜脏层壁层从腔壁移行折转覆盖于内脏器官表面,浆膜脏层和脏层之间的间隙,浆膜腔,胸膜腔、腹膜腔、心包腔,浆膜腔,概 述,正常浆膜,腔,少量液体来自,壁层浆膜毛细血管,内的血浆滤出，通过脏层浆膜的,淋巴管和小静脉,回吸收,润滑作用,浆膜腔积液：病理状态下，浆膜腔内液体增多,概 述,浆膜腔积液分类和发生机制,当液体的产生和回吸收不平衡时，引起积液,根据积液产生原因及性质不同，,分为,漏出液（,transudate),和渗出液,(exudate),漏出液,(,transudate,),为非炎性积液,血浆胶体渗透压降低,毛细血管内流体静脉压升高,淋巴管阻塞,渗出液,(,ex,u,date,),为炎性积液,感染性,：,如化,脓,性细菌、,结核,非感染性,：外伤、化学性刺激、恶性肿瘤,概 述,浆膜腔积液的采集,在胸腔积液采集中可将先抽入注射器的积液再快速推向胸腔底部，反复数次后抽取送检，可使肿瘤细胞检出率由,50%,左右提高为,80.3%,。,标本采集方式,浆膜腔积液中常见的脱落细胞及其临床意义,间皮细胞,形态：细胞圆形或椭圆形，核大，位于中心或偏位，核仁较大，有,1-3,个，均为紫色，含有少数空泡，渗出液中形态可能不规则，有时与癌细胞难于区分，见于恶性肿瘤，淤血等。,免疫组化：间皮细胞表达,CR,、,CK5/6,、,WT-1,、,MC,，腺癌细胞表达,CEA,、,CK7,、,CK19,等等,形态：比白细胞大，细胞染色较淡，核呈肾形，偏位，染色质致密，胞浆多呈泡沫状。见于淤血或恶性肿瘤等。,免疫组化：,CD68,（,+,）,组织（单核）细胞,淋巴细胞数量增多提示存在慢性炎症、病毒、结核菌感染或结缔组织病所致渗出液，少量淋巴细胞亦见于漏出液。,淋巴细胞,中性粒细胞增多常见于化脓性炎症和结核性积液早期，以化脓性渗出液中性粒细胞增多最明显,。,中性粒细胞,浆细胞明显增多可能为多发性骨髓瘤浸润浆膜所引起。,浆细胞,免疫组织化学染色,免疫组化原理,免疫组织化学是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对某些化学成分进行定性、定位、定量测定的一项技术。,组织或细胞内的某种化学物质（待检测物）,抗原,免疫动物,抗体 检测（免疫组织化学）,荧光素 酶 金、银颗粒,原理：抗原和抗体之间的高度特异性结合,链霉菌抗生物素蛋白,-,过氧化物酶连结（,SP,）法,免疫组化原理流程介绍,免疫组化在病理学中的作用,1,、确定细胞类型,2,、辨认细胞产物,3,、了解分化程度,4,、鉴定病变性质,5,、发现微小转移灶、脉管内瘤栓,6,、探讨肿瘤起源或分化表型,7,、指导治疗和预后,8,、辅助疾病诊断和分类,胸水中常见肿瘤及免疫组化,鳞状细胞癌,常用免疫组化：,CK,、,CK5/6,、,P63,、,P40,细胞角蛋白（,cytokeratin,，,CK,）,低分子角蛋白，对腺癌、移行细胞部及低分化鳞癌标记。一般用广谱型角蛋白抗体为好，常用。,有,20,个亚型,CK1,-,CK20,鳞状上皮,细胞角蛋白,5/6,（,CK5/6,）,阳性部位：细胞浆,在正常组织中，鳞状上皮和导管上皮的基底细胞以及部分的鳞状上皮生发层细胞、肌上皮细胞和间皮细胞阳性，腺上皮细胞阴性。因此，可用于鳞癌和腺癌、间皮瘤和腺癌的鉴别诊断。支气管上皮基底细胞、间皮,、,鳞癌、大细胞癌、移行细胞癌、间皮瘤阳性。大多数腺癌为阴性。,常用免疫组化标记,CK7,、,CK20,、,Villin,、,CEA,、,CDX-2,、,PAS,TTF-1,（肺的标记）,腺癌,CK7,：,肺、卵巢、乳腺、胆管,阳性,常常在,(,胃,),肠道的癌为,阴性,CK20,：,只有胃肠道癌和,Merkel,细胞癌阳性,20,CK7,是许多腺上皮及移行上皮中的一种碱性角蛋白。,CK7,通常在下列腺癌中表达：,肺,、,乳腺,、,卵巢（浆液性和粘液性肿瘤）,+,子宫颈肿瘤,、,胆管上皮和胆管癌,、,膀胱移行细胞癌,+,在下列肿瘤中,缺乏,：,鳞状细胞癌,、,结肠腺癌,、,卵巢粘液腺癌,、,肝细胞和肝,-,细胞癌,、,前列腺和前列腺腺癌,、,肾上皮肿瘤,CK7,CK20,免疫组化表达,：,用于胃肠道腺癌、卵巢黏液性肿瘤、皮肤,Merkel,细胞癌诊断。,泌尿系统和移行细胞癌（通常,CK7+/CK20+,）,鳞癌、乳腺癌、肺癌、子宫内膜和卵巢非黏液性肿瘤常阴性。,CK7,和,CK20,的共同表达对于癌的原发部位的诊断尤其有用,CK7,和,CK20,的共同表达,单独,CK7+,或,CK20+,均不能可靠区分肺癌和结肠癌，,CK7,和,CK20,共表达如,CK7+/CK20+,或,CK-/CK20-,有助于诊断开始较模糊的肿瘤。,联合,TTF-1,检测有助于诊断肺腺癌。,CDX2,：,是一种肠特异的转录因子。大约,95%,以上的浸润性结,、,直肠癌可检出,CDX2,阳性表达，胃癌和卵巢黏液性腺癌也可表达,CDX2,与,CK7,、,CK20,配合有助于寻找转移癌的原发部位。,CDX2,CEA,CEA,癌胚抗原：,是从结肠癌中分离而得的一种球蛋白，定位于细胞膜上，对胃、肠、肺、胰、肝等几乎所有的,腺癌,为阳性,显示涎腺或汗腺肿瘤中的腺体成分,用于鉴别腺癌和间皮瘤,神经内分泌肿瘤,常用免疫组化标记,NSE,Syn,CgA,CD56,包括神经内分泌肿瘤、胰岛、垂体瘤、甲状腺髓样癌、皮肤,Merkel,细胞癌、原始神经外胚层瘤（,PNET,）等，目前应用,NSE,、嗜铬蛋白颗粒,A,（,CgA,）及触突素（,Syn,）三种抗体同时或两种一起用，因,NSE,不够特异。,NSE,（神经元特异性烯醇化酶）,一种糖酵解酶,神经元和神经内分泌细胞及相应肿瘤的标记物。,敏强感性，特异性较差。,嗜铬素,A,CgA,（,chromogranin,）,肾上腺髓质细胞（,+,）,神经细胞、神经内分泌细胞及其肿瘤均（,+,）,主要用于神经内分泌细胞肿瘤的诊断,（胰岛细胞瘤、嗜铬细胞瘤、皮肤,Merkel,细胞瘤 ）,Syn,突触素,神经组织标志,CD56,神经细胞黏附分子，主要分布于大多数神经外胚层来源细胞，常用于星型细胞瘤、神经母细胞瘤、神经内分泌肿瘤诊断，也是,NK,细胞瘤的重要标志，也标记小细胞肺癌,1.B,细胞标记抗体：,CD20,、,CD79,、,PAX-5,2.T,细胞标记抗体：,CD2,、,CD3,、,CD4,、,CD5,、,CD7,、,CD8,、,CD45RO,淋巴瘤,B,细胞及其肿瘤主要标记物,CD20,主要分布在,B,细胞、前,B,细胞后期和浆细胞之前的,B,细胞，在浆细胞和,T,细胞淋巴瘤中不表达。是非常可靠的,B,细胞淋巴瘤的标记抗体。,CD79a,是非常重要的,B,细胞淋巴瘤的标记物，前,B,细胞开始到成熟的浆细胞都可以标记，常作为,CD20,的补充，表达于大部分的,B,细胞淋巴瘤。,PAX-5,PAX-5,是,B,细胞特异性激活蛋白，是,B,细胞及,B,细胞淋巴瘤的标记物。表达于非霍奇金淋巴瘤的成熟及前体,B,细胞和经典霍奇金淋巴瘤的,R-S,细胞。,细胞及其肿瘤主要标记物,CD3,是目前认为最能代表,T,细胞的标记抗体，,CD3,是,T,细胞和,NK,细胞的标记物，常用于此类淋巴瘤的分类，在,B,淋巴细胞、巨噬细胞、髓细胞中不表达。,CD5,主要标记,T,细胞，少数,B,细胞（套细胞）可表达。用于慢性淋巴细胞性白血病（,B-CLL,）和,Mantle,（套细胞）淋巴瘤 。,CD45 (LCA),：白细胞共同抗原,存在于前体细胞、成熟的,T,和,B,淋巴细胞、单核细胞、滤泡树突状细胞和粒细胞等白细胞中，是造血细胞的重要标记物，不存在非造血组织。主要用于淋巴瘤、白血病和非造血组织肿瘤的鉴别诊断。,阳性部位：细胞膜,CD21,CD21,是补体,C3d,的受体,免疫组化表达,:,滤泡树突状细胞（,FDC,）,诊断应用,:,证明滤泡树突状细胞的筛状网结构,，用以协助淋 巴瘤的诊断,Castlemans,病（血管滤泡性增生）,FDC,肿瘤,肝细胞肝癌和胆管细胞癌,肝细胞,肝,癌,：,AFP,、,CD34,、,CEA,、,CK8/18,、,CK19,、,Ki-67,、,P53,、,HbsAg,、,Hepatocyte,肝胆管细胞癌：,CK7,、,CK20,、,Villin,、,AFP,、,CD34,、,CEA,、,CK8/18,、,CK19,、,Ki-67,、,Hepatocyte,、,HbsAg,Hepatocyte,：,肝细胞癌多为阳性表达,AFP,甲胎蛋白：,由胎肝细胞提取的一种酸性糖蛋白，细胞浆和细胞膜上表达。它是肝细胞癌、卵黄囊癌的特异性标记。,肝细胞肝癌和胆管细胞癌,CK19,：,分布于单层上皮和间皮,常用于腺癌诊断,肝细胞不表达,而胆管为阳性反应,。,CK8/18,：,主要标记非角化复层鳞状上皮，用于鳞状细胞癌和腺癌的鉴别，肿瘤细胞、肝细胞和胆管上皮细胞胞浆阳性。,Villin,绒毛蛋白,：,正常组织中,，,villin,通常只表达于有刷状缘的细胞上,，,如胃肠道上皮细胞、胰腺和胆管上皮细胞以及肾实质的上皮细胞中（特别是近曲小管）,。,Villin,在胃肠道癌、胰腺癌、胆囊癌和胆管癌组织中有很高的表达率,，,具有明显腺样结构的肿瘤上没有,Villin,表达,，,则这个肿瘤为胃肠道、胰腺、胆囊或胆管来源的可能性极低,。,肝细胞肝癌和胆管细胞癌,CD34,：,表达于早期淋巴造血干细胞、祖细胞、内皮细胞、胚胎纤维母细胞和某些神经组织细胞,多用于标记血管内皮细胞,，,血管源性肿瘤的诊断,，,GIST 80-90%,。,肝细胞肝癌和胆管细胞癌,免疫组化应注意的问题,1.,对某一种肿瘤的诊断，可同时选用几种特异性较高的标志，互相补充。,2.,要正确区分假阳性、假阴性。,3.,要运用“反证法”，既要有阳性标记物的结果，也要有阴性标记物的结果，才能确保诊断的可靠性。,免疫组化常用套餐,鉴别间皮细胞、腺癌细胞,CK7,、,CEA,、,TTF-1,、,CK5/6,、,CR,、,WT-1,鉴别肺腺癌、鳞癌、神经内分泌肿瘤,CK7,、,TTF-1,、,NapsinA,、,CK5/6,、,P63,、,P40,、,syn,、,CgA,、,CD56,是否淋巴瘤,基本项目：,CD2,、,CD3,、,CD20,、,CD79a,、,Ki67,如需分型进一步加项目：,Mum-1,、,CD10,、,Bcl-6,等,判断来源的项目,肺：,TTF-1,、,NapsinA,乳腺：乳腺球蛋白、,GCDFP-15,卵巢：,WT-1,、,CA125,前列腺：,PSA,肝：,Hepatocyte,、,AFP,、,CK8/18,胃肠道：,CK7,、,CK20,、,CDX2,、,Villin,联合判断,注：,仅用于参考，不是,100%,能确定,谢 谢！,