单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,无菌粉针剂分装过程验证（,培养基模拟分装试验),B1,李洁丽 陈碧娴,莫榕彬 卢立焙,目录,一.,培养基模拟分装试验,目的,二.验证前的准备,三.无菌模拟试验的通常流程,四.实验记录表,五.粉针剂对培养基灌封的要求,六.培养基分装的合格标准,七.培养基灌装失败的原因分析,八.其他,一.,培养基模拟分装试验,目的,证明在无菌粉针分装过程中所采用的各种方法和各种规程以,防止微生物的水平,达到,可接受的合格标准的能力,，或提供保证所生产产品的,无菌性的可信限度,达到可接受的合格标准的证据。,二.验证前的准备,（一）需要完成的验证,1.公用设施确认和验证,空调系统的确认和验证,水系统的确认和验证,其它设施的验证,2.设备的确认和验证（IQ,OQ,PQ等）,3.灭菌工艺的验证,无菌室消毒验证,湿热，干热灭菌工艺,在线灭菌验证,除菌过滤的验证,过滤器的泡点测试,4.清洗验证,胶塞的清洗,瓶子的清洗,5.计算机验证,(二）主要程序的建立,人流，物流的确定,设备使用要求和参数,无菌室消毒和维护的要求,粒子和微生物监控的要求和频率,.,（三）人员培训,设备使用的培训,人员的更衣培训和无菌技术的培训,取样的培训,三.无菌模拟试验的通常流程,1.,将培养基暴露于设备、容器胶塞密封系统的表面和关键环境条件中，并模拟实际生产完成工艺操作。,2.,对装有培养基的密闭容器进行培养以检查微生物的生长。,3.,评价结果，确定实际生产中（如灌装前的调试、加入无菌原辅材料、无菌连接、灌装和密封）产品污染的可能性。,（一）、培养基灌装试验的培养基和模拟替代物,1.培养基,CASO-broth USPX XII ,（胰酶酪胨大豆培养基,）,培养基的要求,无菌性试验合格,抑菌性试验合格,2.模拟替代物,抑菌性试验合格,物理、化学性质相似试验,（二）,MFT的前期工作,1.模拟灌装试验人员的培训,（1）模拟灌装试验人员无菌操作知识培训,（2）模拟灌装试验人员无菌检验知识培训,（3）模拟灌装装备检修人员的无菌设备维修 知识培训,（4）模拟灌装试验SOP培训（含生产、QC、计量、装备）,（5）模拟灌装试验SOR培训（含生产、QC、计量、装备）,2.环境验证,（1）HVAC系统的微生物、尘粒验证,（2）洁净区压差验证,（3）洁净区风速验证,（4）B级背景下A级单向层流验证,3.无菌生产设备的灭菌验证,（注意：模拟分装设备应在无菌效期内进行）,（1）灭菌设备如隧道烘箱、干热灭菌柜、湿热灭菌柜灭菌效果验证,（2）直接接触无菌药品的设备、容器、管道灭菌效果验证,（3）除菌过滤器除菌效果验证,4.物料、用品及用具的灭菌,（1）无菌培养基的准备,（2）分装模拟替代物的灭菌,（3）中间体无菌验证。（如果需要的话）,（4）直接接触无菌药品的内包材灭菌,A 塑料袋无菌验证,B 安瓿、西林瓶无菌验证。,C 胶塞无菌验证,（5）进、出器具的消毒,（6）装载容器、用品及用具灭菌,（7）无菌物料检测仪器、物品灭菌,（8）蠕动泵、管道输送灭菌,5.生产检验人员的无菌或微生物验证,无菌服无菌验证,人员的手套、手臂、口罩、胸部、前额（或眼罩）的微生物验证,（三）培养基灌装,流程,1.,实验用培养基和培养温度的选择,选择时的注意事项,适应广谱微生物生长，包括细菌和真菌,较好的澄明度，较小的粘度,易于除菌过滤,常用培养基：3大豆胰蛋白肉汤（TSB）,厌氧培养基仅在特殊情况下使用,培养温度,FDA-,20-35,，目标值,2.5,，,不少于,14,天,；如选择,两个温度,，则每一温度下至少培养,7,天,，从低温开始。,PIC-,20-25,下至少,14,天,，或，先,20-25,下,7,天，然后,30-35,下,7,天。,2.,灌装体积与数量,灌装体积,每只容器的灌装体积不少于总容积的1/3,同样，灌装体积也不宜过大,既要考虑到瓶倒转或旋转时，培养基能充分接触到容器和密封件的内表面，又要保证容器内有足够的氧气支持微生物生长。,灌封数量,综合考虑统计学要求和实际生产批量。,FDA(,5000,瓶,),：如果正常生产的批次量低于,5000,瓶，则培养基灌封至少应为实际生产线的最大批次量。,PIC(,3000,瓶,),：如果正常生产的批次量低于,3000,瓶，则培养基灌封至少应为实际生产线的最大批次量。,3.灌封时间与批次量控制,灌装时间,对于初始性验证，培养基灌封实验应安排在一周内的不同时间进行。,对于再验证，可选择在一周结束或其它最差条件下进行。,灌封时间要涵盖实际生产班次。,批次量控制,初次验证，至少要连续成功灌封3个批次。,再验证至少需要成功灌封1个批次。,（四）试验结果,和分析,结果判定：经试验灌装好的培养基按以上要求培养14天后，应将每瓶培养基对着灯光仔细目测。透明、澄清、无混浊的培养基判为无微生物生长；培养基混浊或有悬浮的菌丝或菌落，则需做进一步的微生物生长检查，以确定培养基是否真正染菌。一旦确认染菌，应明确记录瓶号、瓶数，同时应检查铝盖、胶塞的密封情况；若有破损应记录并检查其破损原因。对微生物污染的样品应进行鉴别试验，鉴别的内容至少应包括菌落、细胞形态学及革兰氏染色特性等。,1.样品的培养,置于3035的温度下至少培养7天，然后,转入2025至少培养7天。,在第三天和第七天至少观察培养基样品微,生物的生长情况一次，并且在检测期间的,最后一天至少再观察一次。,2.结果的分析,对微生物污染的样品应进行鉴别试验，鉴别的内容,至少应包括菌落、细胞形态学及革兰染色特性等。,不成功（染菌）原因,（1）环境（生产.检验.储存.）,（2）设备,（3）物料,（4）转移过程的容器,（5）水,（6）检测,（7）人员,更衣,?,消毒,?,操作过程,?,操作人员,?,QC,人员,?,管理人员,?,其它人员,?(,如外来参观人员等,),（,8,）细菌种类鉴别及污染源,A.,链菌、球菌 人员,B.,杆菌 水系统,C.,其它细菌 其它,四.实验记录表,(实验记录表在Word文件里）,五.粉针剂对培养基灌封的要求,第一种方法,在灌装线上直接灌装液体培养基，灌装后压塞,-,轧盖或熔封。,第二种方法,先灌装干粉培养基，再加入注射用水,第三种方法,先灌装惰性剂，再加入液体培养基,要点,采用第二、三种方法时，所用惰性剂或干粉培养基需事先经过辐射灭菌。,常用惰性剂有聚乙二醇,8000,、羧甲基纤维素、乳糖。,六.培养基分装的合格标准,WHO 1973 合格标准：0.3%,PDA mid-1970s合格标准：0.1%,PDA mid-1980s 引入了统计学的概念,当样本3000瓶，可信限为95%时污染率小于等于0.1%为合格标准,计算公式：,实际污染率（95可信限的控制上限）100 模拟分装的瓶数,实际污染率应小于等于0.1%，判为合格,污染瓶数，灌装瓶数和95置信限值的关系,污染瓶数,012345,95可信值,3 4.746.37.759.1510.51,的控制上限,最少的灌装,3000475063007760916010520,数量,举例：模拟分装了5000瓶，发现有一瓶污染，问结果是否合格？答：有一瓶污染，其95%可信值的控制上限为：4.74 实际污染率=4.74/5000*100%=0.0949%0.1%判为合格。,培养基灌装的合格标准FDA和EU要求,5000瓶,0污染，合格,1瓶污染，调查原因，3批再验证,5000瓶 10000瓶,1瓶污染，调查原因，重复一次验证,2瓶污染，调查原因，3批再验证,培养基灌装的合格标准企业的要求,5000瓶,0污染，合格,1污染，调查原因，回顾最近3批验证,最近3批0污染，重复一次验证,最近3批有1污染，3批的再验证,2污染，调查原因，3批的再验证,七.培养基灌装失败的原因分析,无菌测试中产品阳性,培养基灌装时环境超标,日常生产时环境超标,无菌测试时环境超标,培养基灌装中发现阳性瓶,增加MD灌装数量和环境监控的频率，特别是设备安装时的监控数据,增加监控的频率，找出潜在的原因,增加MD环境监控的频率,审核一下培养基配制和消毒的过程,无菌测试中产品阳性,增加培养基灌装的瓶数,增加日常环境超标位置的取样频率,增加培养基灌装的瓶数,增加MD环境超标位置的取样频率,审核无菌测试的程序,审核测试房间的灭菌和消毒程序,培养基灌装时发现环境超标,增加培养基灌装的瓶数，确定对产品影响,审核取样过程,审核人员的操作，更衣，消毒等,审核取样过程,审核人员的操作，更衣，消毒等,日常生产时环境超标,审核取样过程,审核人员的操作，更衣，消毒等,八.其他,1.,再验证（3批验证）,新设施,新的设备或过程，并使用不同的操作原则,生产线被安装到新的厂房或新的房间,超过一年以上停止无菌生产,无菌区域多个地方同时进行房间或设备的整修,任何首次验证或确认验证失败,任何环境或无菌测试失败，质量部根据调查结果，所作出再验证的决定,2.确认验证（1批验证）,一年二次验证（间隔48个月）,非计划的空气流向的改变（如停电等），并且根据QA判断，需要验证,无菌灌装间重大的，单个设备的维修或设备的改变,无菌灌装间灌装设备布局的重新调整,超过半年以上停止无菌生产,灌装验证中有一个阳性,非过程原因导致的模拟灌装验证的失败,谢谢！,