,NEB,产品知识和市场培训,2001年8月,市场与技术支持部,第一部分,NEB,厂家背景回顾,美国总部： Beverly, MA,19752001,支柱产品工具酶,先进的基因克隆和高表达体系的构建技术,120种自主开发的酶,60多种酶是由NEB首先筛选到并进入商品化生产,二十五年的生产历史,国际化的生产和营销网络,在全世界35个国家和地区有分销商,美国、英国、德国、加拿大四个生产基地,专业水准的厂商,发酵中心生产部,酶制备和DNA重组技术中心研发部,分子生物学和寄生虫学研究中心基础研究院,第二部分,NEB,产品讲解,核酸工具酶,DNA限制性内切酶,DNA聚合酶、逆转录酶,Vent系列的PCR聚合酶,DNA/RNA修饰酶,单位的定义,在,50,l,反应体系中，,1,小时内，完全消化,1,g,的,DNA,所需要的酶量为,1 Unit,包装与规格,常用酶大多数为,10 U/,l,缓 冲 液,4,种不同颜色标记的标准缓冲液和特定缓冲液,稀 释 液,分为,A,、,B,、,C,三种，依表询,储 藏 条 件,在不被稀释的情况下，可长期存放在,零下20度长达20之久,DNA限制性内切酶,严格的质量检验：,非特异性的内切酶活性检测,核酸酶污染检测,外切酶污染检测,蓝白斑筛选检测,DNA限制性内切酶,针对于常用在克隆实验中的酶,检验过量酶切对DNA末端的完整性是否有破坏,NEB自主克隆的酶基因,从重组菌株中提纯的酶,随酶另附一管BSA,酶识别位点被dam或dcm甲基化后不能被切动,酶是否耐热,经过蓝白斑法检测,目录书中出现的标志符号的含义,最佳的工具酶反应温度,酶所对应的缓冲液编号,DNA限制性内切酶,Homing 核酸内切酶,识别12-40碱基的长的、对称识别位点的稀有内切酶,同裂酶的概念,识别同一酶切位点的一组内切酶,BSA的作用,酶保护剂，在反应中保证酶具有最佳的活性,DNA限制性内切酶,小常识：,NEB限制性内切酶的卖点：,种类非常齐全，（丰富的稀有酶）,稳定性好，存放时间长,价格在进口酶类里适中,质量可靠,DNA限制性内切酶,DNA/RNA聚合酶,DNA或RNA的探针标记,3末端和5末端的补平,3末端的碱基置换,DNA测序反应、定点突变和转录,3末端突出的切平,特 性：,以单链DNA或RNA为模板，从5端向3端合成新链,应 用,性能指标：,5端向3端的外切活性,3端向5端的外切活性,聚合速度,错配率,耐热性,延伸能力,常用的种类：,E.coli,DNA Polymerase I,Klenow Fragment （35 exo,-,）,T4 DNA Polymerase,Terminal Transferase,M-MuLV Reverse Transcriptase,*M-MuLVReverse Transcriptase,（RNase H,-,）,T7/Sp6 RNA Polymerase,DNA/RNA聚合酶,NEB Vent系列聚合酶,Vent DNA Polymerase,主要应用：常规PCR扩增,双脱氧法测序,NEB Vent系列聚合酶,Vent DNA Polymerase,与常规Taq酶的错配率比较,卖点：,高保真,耐热性非常好,DNA/RNA 修饰酶,DNA / RNA Modifying Enzyme,连接酶 Ligase,激酶 Kinase,碱性磷酸酶 Phosphatase,Beta琼脂糖酶 Agarase,甲基化酶 Methylase,核酸酶 Nuclease,外切酶 Exonulease,内切酶 Endonulease,recA重组蛋白酶recA Protein,DNA/RNA 修饰酶,重点产品：,T4 DNA Ligase,单位定义：20000 NEB Unit = 300 Weiss Unit,4000 NEB Unit = 60 Weiss Unit,T4 Polynucleotide Kinase （T4 PNK）,对DNA5末端进行磷酸化，用于探针标记或克隆,Alkaline Phosphatase, Calf Intesinal （CIP）,去除DNA 5和3的磷酸基团，用于制备5的置换标记和载体克隆，阻止载体的自我连接。,分子量标准,DNA分子量标准,常用类型：整数分子量的 Marker,1kb DNA Ladder,2-log DNA Ladder,100bp DNA Ladder,NEW,噬菌体DNA和质粒DNA,酶消化型的DNA分子量标准,非整数型的,DNA分子量标准,DNA分子量标准,PGF 分子量标准,DNA被包埋在凝胶中，以注射器的形式包装,用于几十kb至上千kb的DNA分离时的Marker,脉冲电泳分离,分子量种类：,Low Range,MidRange,Lambda Ladder,Yeast Chromosome,RNA 分子量标准,适用于普通凝胶或变性胶,条带为整数的分子量,RNA分子量标准,蛋白分子量标准,蛋白分子量标准,普通型2-212kDa （精确）,预染型6-175kDa （估计）,HRP蛋白Marker检测包 6.5-165kDa,（Biotin标记，Biotin Ab）,蛋白工具酶,蛋白酶,内切糖苷酶,外切糖苷酶,蛋白激酶和抑制剂,蛋白磷酸化酶和抑制剂,Factor Xa Protease,探针标记杂交检测,NEBlot Kit,随机引物法探针标记试剂盒,下游应用：,文库筛选,Southern / Northern,原位杂交,卖 点：,标记的dNTP参入率高,模板用量在25ng到2ug,半小时即可完成标记反应,可用于多种类型的标记dNTP（同位素或非同位素标记）,NEBlot Phototope Kit,随机引物法,生物素,探针标记试剂盒,用于化学发光检测,与Phptotope-Star Chemiluminescent Detection Kit配合使用,生物素标记的探针稳定，可长时间存放,杂交后可洗脱下来，进行反复杂交,Phptotope-Star Chemiluminescent Detection Kit,卖 点：,灵敏度同位素检测法相当,曝光时间短，只需10-70分钟,信号稳定，可通过改变曝光时间来摸索最佳的信号强度,第三部分 NEB 蛋白表达产品介绍,pMAL 蛋白融合表达,与纯化系统,卖 点：,生产级别的应用,高水平表达量,1升培养上清可达到100mg的蛋白产量,与MBP融合表达可以增加蛋白的溶解性,IMPACT蛋白表达,与纯化系统,卖 点：,应用了蛋白内含肽自我剪切技术,无需蛋白酶去除标签，只需一次过柱纯化过程,Intein可接在蛋白的C端或N端,IMPACT-CN System,IMPACT-TWIN System,卖 点：,应用了蛋白内含肽自我剪切技术，将两个Intein接在目的蛋白的两端。,无需蛋白酶去除标签，只需一次过柱纯化过程,Intein行使剪切功能后，可在目的蛋白两端产生带S的氨基和羧基，可环化，可标记,第三部分 NEB英文目录附录的内容介绍,NEBcutter V1.0,内容一 分子生物学数据库索引,REBASE 限制性内切酶数据库,3100种限制性酶的相关信息,酶的基因序列、甲基化敏感位点、结构,5600篇参考文献,InBase 内含肽数据库,分子生物学数据库网址总汇,224个网址,可按功能领域分类查找,内容二 工具酶常用查询表,以酶识别序列分类的索引,同裂酶索引,限制性内切酶的发展历史和知识背景,NEBuffer的酶 活性对照表,双酶切缓冲液选择表,酶稀释液对照查询表,限制性酶在引物延伸反应中的活性表,限制性核酸内切酶的热失活对照表,酶切反应酶用量查询表,补平反应新酶识别位点查询表,相同粘端酶查询表,限制性酶识别位点中甲基化位点查询表,内容三 分子生物学常用工具表,常用E.coli菌株表型及基因型查询表,常用遗传标记,NEB菌株描述,遗传密码表,氨基酸化学结构,常用单位换算,常用载体上的酶识别位点出现频率,常用载体的酶切图谱,内容四 分子生物学实验Protocol,琼脂糖包埋的DNA的限制性酶消化,基因组酶消化的选择指导,甲基化酶反应,第五部分,NEB,销售统计分析,单位：万美金,QIAGEN,Clontech,NEB,分子生物学试剂产品销售比例,统计 2000.42001.3,2000.4 2001.3,2001.42001.7,NEB产品种类销售统计,7%,62%,12%,7%,7%,5%,0%,XS Enzyme,Restriction Enzyme,Modifying Enzyme,DNA Marker,Protein Marker,Protein Expression,Others,比去年同期,增长一倍多,Takara,LTI (Gibcol-BRL),Promega,Roche,MBI,华 美,国 内 竞 争 对 手,市 场 价 格 比 较,