单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物,课题 DNA的,粗,提取与鉴定,染色体成分,蛋白质,RNA(少量),DNA,提取DNA的基本思路：,利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。,1,课题 DNA的粗提取与鉴定染色体成分蛋白质RNA(少,DNA的粗提取与鉴定,1原理、方法和目的,基本原理,方法,目的,DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14 mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低,溶于NaCl溶液中并稀释,NaCl溶液为2 mol/L时，DNA溶解，而部分蛋白质发生盐析生成沉淀，通过过滤可除去部分蛋白质及不溶于NaCl溶液的杂质,当NaCl溶液稀释至0.14 mol/L时，DNA析出，过滤可除去溶于NaCl溶液的部分蛋白质和其他杂质,DNA不被蛋白酶所水解,加入嫩肉粉,嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白质,（,酶的专一性）,DNA不溶于酒精溶液,加入冷却酒精(95%),DNA析出，除去溶于酒精的蛋白质,DNA可被二苯胺染成蓝色,加入二苯胺，并沸水浴,鉴定DNA,高温,DNA耐高温,DNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNA热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受6080的高温，而DNA在80以上才会变性。,DNA对洗涤剂耐受性 洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。,加入,洗涤剂,2,DNA的粗提取与鉴定 1原理、方法和目的基本原理方,1）不同浓度NaCl中DNA溶解度不同。,2）DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同，DNA不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精。,3）DNA和蛋白质对酶耐受性不同：酶的专一性蛋白酶水解蛋白质。但是对DNA没有影响。,4）DNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNA热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受6080的高温，而DNA在80以上才会变性。,5）DNA和蛋白质对洗涤剂耐受性不同：洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。,提取DNA的原理包括DNA的,两个方面,溶解性和耐受性,1.DNA的粗提取,实验原理,3,提取DNA的原理包括DNA的,2.实验材料,动物,鸡血细胞液的优点,提醒：,人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有DNA，不适于作为DNA提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。,鸡血红细胞、白细胞中都有细胞核，含大量的DNA,既经济又易取,植物：洋葱、,新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。,4,2.实验材料动物鸡血细胞液的优点提醒：人和哺乳,3、方法与过程,1).制鸡血细胞液,0.1,g/mL,柠檬酸钠,100,mL,活,鸡鲜血,180mL,500mL烧杯中，玻棒,搅拌,，离心或静置沉淀。,离心或静置后去掉上清液,血浆,血细胞,5,3、方法与过程 1).制鸡血细胞液0.1g/mL柠檬酸钠10,关于DNA粗提取的实验材料的选择，也经过了多次实验结果的比较，最终选择鸡血做实验材料的原因是什么？请回答下列问题：,（1）鸡血中红细胞,，家鸡属于鸟类，新陈代谢旺盛，因而血液中,细胞数目较多，可以提供丰富的,（2）实验前由老师制备鸡血细胞液供同学们做实验材料，而不用鸡全血，主要原因是,（3）生活在牧区的人们，采集羊、牛和马血比较方便，若他们按实验要求完成实验步骤后，结果是,，,这是因为,，,但若改用动物肝脏做实验材料，实验可以顺利进行，这是因为,。,（4）若选用动物肝脏做实验材料，在提取之前，最好增加,程序，使组织细胞更易分离。,含有完整的、成形的细胞核,红,DNA量，所以一般采用鸡血,鸡的全血包括血浆和血细胞，血浆中无DNA，全血中除掉血浆后就是浓缩的血细胞液，DNA的相对含量提高了。,在实验中很难提取到DNA,哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核，反靠白细胞,和淋巴细胞中的少量DNA，在实验中很难提取到,肝细胞中含有细胞核，并且肝组织容易被破坏，有利于DNA的提取,若使肝组织易分离，将肝细胞剪碎、研磨是一种简便易行的方法。,6,关于DNA粗提取的实验材料的选择，也经过了多次实验结果的比较,提取细胞核物质：,溶解核内DNA：,在滤液中加,2,mol/L的NaCl,溶液并搅拌，使染色质中DNA,与蛋白质分离，DNA充分溶解，,过滤(除杂质),析出DNA：,DNA黏稠物再溶解：,在烧杯中用,2,mol/L的NaCl,溶液溶解DNA。,提取较纯净的DNA：,DNA的鉴定：,取,两试管,各加2mol/L,的NaCl溶液，,将DNA充分溶解于其,中一试管，然后向两试管,加入,二苯胺试剂,，混匀沸水中加热,5min后,冷却,，可发现DNA与试剂反应使溶液呈,现蓝色,。,滤取DNA黏稠物：,过滤含DNA的,NaCl溶液,：,用两层纱布过滤。,2)实验方法步骤：,在上述溶液中缓缓,加入蒸馏水，,并沿一个方向,轻轻搅拌,，出现丝状物；,当丝状物不在增加时，停止加水,（此时NaCl溶液的浓度相当于,0.14mol/L,）。,用多层纱布,过滤,，含DNA的粘稠物留在纱布上。,滤液中含有DNA。,所得的滤液体积分数为,95%的冷却酒精,50mL，用玻棒沿一个方向,轻缓搅拌,，溶液中（,析出,）出现乳白色丝状物，用,玻棒,将,丝状物,卷起，并用滤纸吸取上面的水分。,利用细胞吸水破裂，细胞核内物质释放出来，后用,纱布,过滤取其滤液。,血细胞在蒸馏水中易吸水而导致,细胞膜和核膜,的破裂，据此可得出含核DNA的溶液。,7,提取细胞核物质：溶解核内DNA：在滤液中加2mol/L的Na,鉴定,不变蓝,对照组,溶液逐渐,变蓝,丝状物(DNA),实验组,图示,结果,加入物质,比较,均加入：,4 mL二苯胺试剂,2mol/LNaCl溶液5 mL,鉴定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。,自变量,你能采用其他方法对DNA进行鉴定吗？,洋葱的鳞片叶表皮细胞,取少许丝状物，置玻片中央，,加1滴,甲基绿,溶液，丝状物变成,绿色。,鉴定所用的试剂是,二苯胺,或,甲基绿,。,用,二苯胺,须加热。用,甲基绿不用水浴,加热。,8,鉴定不变蓝对照组溶液逐渐丝状物(DNA,9,9,注 意 事 项,制备鸡血细胞液时，要在取鸡血的同时加入柠檬酸钠，静置后上层是血清，下层为所需要的血细胞。,整个实验中,加入“,两次蒸馏水，,三次NaCl溶液,，一次酒精,”,两次加蒸馏水的目的不同，一是涨破细胞，二是稀释溶液。,酒精最好用95%的冷酒精;,加蒸馏水或加入酒精用玻棒搅拌时,动作要,轻缓且朝一个方向,。,保证DNA分子的完整性。,使用时注意玻璃棒不要碰到烧杯底。鉴定DNA时需沸水浴加热。二苯胺试剂要现配现用,否则会影响鉴定的效果.二苯胺是一种有毒性的试剂,使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位.,盛放鸡血细胞的容器,最好是塑料容器,（鸡血细胞破碎后释放的DNA，容易被玻璃容器吸附，造成提取过程中DNA的损失）,10,注 意 事 项,下图为“DNA粗提取和鉴定”实验的相关操作。这些操作目的正确的是（）,A.是洗涤血细胞，去除血细胞表面的杂质,B.是溶解DNA，去除不溶于酒精的杂质,C.是溶解DNA，去除不溶于2 mol/L NaCl溶液的杂质,D.是稀释NaCl溶液，去除不溶于低浓度NaCl溶液的杂质,是释放核物质,是提纯DNA，去除溶于酒精的杂质，,稀释NaCl溶液，析出DNA。,C,11,下图为“DNA粗提取和鉴定”实验的相关操作。这些操作目的正确,甲、乙两图为“DNA的粗提取与鉴定”实验中涉及的两个操作装置图。相关叙述正确的是,甲 乙,A图甲的烧杯和图乙的试管中所用溶剂都为NaCl溶液，但两者浓度不同,B图乙试管经少许加热后即可观察到一支试管中的溶液明显变蓝，另一支试管中的溶液不变蓝,C图甲操作需用玻棒迅速搅拌以使DNA成为絮状沉淀并缠绕在玻棒上,D图乙操作中所用的二苯胺需现配现用以达到较好的鉴定效果,D,12,甲、乙两图为“DNA的粗提取与鉴定”实验中涉及的两个操作装置,植物细胞,需要先用,洗涤剂,（洗发香波、沐浴液、洗洁精等）,溶解细胞膜。,洗涤剂可以瓦解细胞膜,的原因是：,洗涤液中含有十二烷基硫酸钠和碱，,它们可使细胞膜破裂，蛋白质变性，使蛋白质与DNA分离开来。,利于DNA的释放。,动物细胞膜是不用试剂（,洗涤剂）,破坏的，,因为动物细胞膜外面没有细胞壁的保护,，放在清水中自然的就会吸水而胀破，释放出其中的DNA等物质。,4、,植物：新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。,13,植物细胞需要先用洗涤剂（洗发香波、沐浴液、洗洁精等）溶解细胞,方法步骤,1、将30g香蕉或菜花切碎，放入研钵中。向研钵中加入2g,氯化钠,，研磨直至成半流体状。,3、将混合液用两层纱布过滤，向滤液中加入,预冷,的10ml,乙醇,溶液，静置，可产生絮状的DNA。,4、取两支试管，分别加入5ml生理盐水，将DNA挑至其中一支试管中，轻轻搅拌使其溶解。,有利于DNA的溶解,2、向研钵中加入10ml蒸馏水或凉开水，搅拌。然后加入10ml,洗涤剂,，轻轻搅拌。,能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；,DNA析出，除去溶于酒精的蛋白质,14,方法步骤1、将30g香蕉或菜花切碎，放入研钵中。向研钵中加入,例题1：下列图示中能反映DNA,溶解度,与NaCl溶液浓度(mol/L)之间的关系的是（）,C,0.14,DNA,溶解度,0.14,0.14,0.14,DNA,溶解度,DNA,溶解度,DNA,溶解度,A,B,C,D,NaCl浓度,NaCl浓度,NaCl浓度,NaCl浓度,15,例题1：下列图示中能反映DNA溶解度与NaCl溶液浓度(mo,C,0.14,DNA,析出量,0.14,0.14,0.14,DNA,析出量,DNA,析出量,DNA,析出量,A,B,D,NaCl浓度,NaCl浓度,NaCl浓度,NaCl浓度,2：下列图示中能反映DNA析出量与NaCl溶液浓度(mol/L)之间的关系的是 （）,B,溶解度与析出量的关系是,相反,16,C0.14DNA析出量0.140.140.14DNA析出量D,