单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,2024/11/18,CD,/,ORD,发展历史,196,1,Cary Model 60 Spectropolarimeter,Jasco,AP-1,196,3,Jasco ORD/UV5,1960,-1965,Jobin-Yvon,CD,Cary 61CD,Jasco ORD/UV5,-CD,1969,Cary 1401CD,1970,Jasco J-20,197,2,Jasco J-40 CD/ORD,19,78,Jasco J-500,1980 J-200,1983,Bio-Logic 400,1986 J-600,1990,Jasco J-700CD,Jabin-Yvon CD6,AVIV 410(Cary 60),199,9,Jasco J-810,Bio-Logic MOS-450,2003,APP ChiraScan,2005,Jasco J-815,2006,APP ChiraScan Plus,2007,AVIV Model 420,2013,new Bio-Logic MOS-500,newJasco J-1500,2023/9/5CD/ORD发展历史 1961 Cary M,2024/11/18,2023/9/5,2024/11/18,2023/9/5,2024/11/18,圆二色,Circular Dichroism,对左旋和右旋圆偏光的吸收不同，形成椭圆偏振光,2023/9/5圆二色 Circular Dichroism,2024/11/18,2023/9/5,2024/11/18,-,螺旋,-,Helix,-,折叠,-Sheet,-,转角,-,Turn,poly(Pro)II,无规则卷曲,Random,2023/9/5-螺旋-Helix-折叠-Sh,2024/11/18,-band(nm),+band(nm),-,螺旋,-,Helix,222，208,192,-,折叠,-Sheet,216,195,-,转角,-,Turn,220-230(弱),180-190(强),205,左手螺旋P2结构,poly(Pro)II,190,210-230(弱),无规则卷曲,Random,200,212,2023/9/5-band(nm)+band(nm)-,2024/11/18,-,Helix,-,Sheet,Turn,Random,-helix:41%,-Sheet:15%,Turn:23%,Random:21%,2023/9/5-Helix-SheetTurnRand,2024/11/18,蛋白质近紫外,CD,表征三级结构信息,蛋白质中芳香氨基酸残基,如色氨酸,(Trp),、酪氨酸,(Tyr),、苯丙氨酸,(Phe),及二硫键处于不对称微环境时，在近紫外区,2,6,0,320nm,，表现出,CD,信号。,研究表明：,色氨酸在,290,及,305nm,处有精细的特征,CD,峰；,酪氨酸在,275nm,及,282nm,有,CD,峰；,苯丙氨酸在,255,、,260,及,270 nm,有弱尖锐的峰,2023/9/5蛋白质近紫外CD 表征三级结构信息,2024/11/18,2023/9/5,2024/11/18,2023/9/5,2024/11/18,2023/9/5,2024/11/18,2023/9/5,2024/11/18,2023/9/5,2024/11/18,Bio-Logic MOS-500,Jasco J1500,APL Chirascan,2023/9/5Bio-Logic MOS-500Jasco,2024/11/18,2024/11/18,Bio-Logic MOS-500,Jasco J-,1500,光源,150W,150W,2023/9/52023/9/5Bio-Logic MOS-,圆二色谱仪课件,2024/11/18,光柵,-,稜鏡,就色散而言，光栅的性能较优于棱镜,第一，由分辨本领知，光栅可经由增加光栅数或观察光栅的高级谱线,(,较大之,p,值,),来增大其分辨本领；而棱镜只有增大棱镜一个方法来增大，这是光栅优于棱镜的一点。,第二，用棱镜分光时，因为色散是和波长的三次方成反比，所以实际上所看到的相同波长间隔的光谱区域并不相等，而是长波长的光谱区域较短，短波长的光谱区域较长。用光栅分光时，因为光栅方程式示出绕射角与入射光的波长成正比，所以，所看到的相同波长间隔的光谱区域大致相等，这是光栅优于棱镜的第二点。,第三，就光谱而言，对于宽度相同的入射缝，光栅形成的谱线较明亮，易于观察。根据上面从色散的观点所讨论知道，光栅在这方面较优于棱镜，而这也是光栅分光仪较常被使用的原因。,2023/9/5光柵-稜鏡就色散而言，光栅的性能较优于棱镜,2024/11/18,2024/11/18,-operation in NIR calls for,very narrow slits,-large bandpasses are not,possible in the low UV,since slitwidth is,mechanically limited to,2 or 3 mm,Jasco J-800 to keep constant 1 nm bandwidth*,following slitwidths,(nm)slitwidth(,m,m),900,0.0,11,800,0.0,13,700,0.0,19,600,0.0,27,500,0.0,53,400,0.,104,300,0.,278,250,0.,538,200,1,.,344,170,2,.,770,狭缝宽度,Bio-Logic MOS-500 to keep constant 1nm bandwidth,Slitwidth always 2mm,from 163nm to 1250nm,2023/9/52023/9/5-operation in,2024/11/18,Jasco CD,狭缝校准,2023/9/5Jasco CD 狭缝校准,2024/11/18,Jasco CD,波长校准,2023/9/5Jasco CD 波长校准,2024/11/18,Jasco CD,圆二色椭圆度校准,2023/9/5Jasco CD 圆二色椭圆度校准,2024/11/18,光源:,三种光源,(Xe,/Hg-Xe/,钨丝灯,),设计,Xe,光谱扫描用,(,130175 W,),W,波长,5,0,0nm,以上用,Hg-Xe,停流或变温检测用,Bio-Logic MOS-500,Jasco CD,单光源设计,2023/9/5光源:三种光源 (Xe/Hg-Xe,2024/11/18,2023/9/5,2024/11/18,氮气吹扫,Bio-Logic MOS-500,1,85,nm,以下,3,升,/min.,1,85,nm,以上不需氮气吹扫,Jasco&APL CD,3-10L/min,2023/9/5氮气吹扫Jasco&APL CD,溶剂,内含物,建议清洗方法,水溶液,蛋白质,DNA,生物制剂,含洗涤剂温水,浸泡、,稀酸,润冲再,大量,纯,水冲洗,。,水溶液,盐溶液,温水,、,酸清洗,、,大量水依次冲洗,。,水溶液,碱性溶液,含洗涤剂温水,浸泡、,稀酸,、,大量水依次冲洗,。,有机溶液,油性基质,溶剂，含洗涤剂温水，稀酸清洗，大量水冲洗,有机溶液,酒精溶液,溶剂清洗，大量水依次冲洗,有机溶液,酸性溶液,溶剂清洗，大量水依次冲洗,有机溶液,碱性溶液,溶剂，稀酸清洗，大量水依次冲洗,比色池清洗建议,1 如何清洗比色池:,需要确定比色池上污染物类型。下表中列出了一些清洗建议：,荧光测量：使用5M硝酸清洗比色池，使用前用大量水冲洗。,稀酸：,2M,稀盐酸或,2M,稀硝酸,酸：,5M,盐酸或,5M,硝酸,溶剂清洗：使用对样品溶解力最强的溶液清洗,大量水清洗：使用至少,10,倍的纯水（包括去离子水，蒸馏水或,RO,）,清洗,清洁剂：如果可以使用中性清洁剂，使用后，用稀酸，大量水将清洁剂清洁干净,溶剂内含物建议清洗方法水溶液蛋白质 DNA 生物制剂含洗涤剂,2,注意事项：,保持比色池清洁干净是比色池可长时间有效使用的最重要因素之一。日常工作时，,永远不可以令比色池处于干燥状态,。在使用间隔期间，如将比色池置于水或有机溶液中，比色池就不会变干或者粘附。只可以使用镜头清洁纸或细布擦拭光学配件表面，大多数的纸制品都含有木纤维，会刮伤会损坏比色池界面或表面。日常工作结束以后，一定要将比色池清洗干净，变干后放置在合适的容器中。,2 注意事项：保持比色池清洁干净是比色池可长时间有效使用的最,3,特殊情况,5M,硝酸：不可以用于清洗具有抗反射或具有镜面涂层的比色池,超声波清洗器：不建议使用超声波清洗器清洁比色池。每个清洗器都有不同的频率，如果清洗器同比色池产生共振，就会毁坏比色池。,3 特殊情况5M硝酸：不可以用于清洗具有抗反射或具有镜面涂层,CD(,圆二色光谱仪,),样品的前处理,在测量,CD,以前先测量一般,UV/VIS,吸收光谱。,CD,光谱的需求与,UV/VIS,一样：在,0.5-1.0,吸收值范围内的讯号会有最好讯杂比。通常样品与溶剂吸收值和大于,2 O.D.,时将会很困难得到正确的数据。,实际上在低波长,UV,扫描很困难得到正确吸收值。大部份现今光谱仪都限制在,190nm,以上，因此任何一次低于,200nm,以下测定将会是个问题。所以通常会建议直接使用,CD,光谱仪来做吸收光谱测量。,CD(圆二色光谱仪)样品的前处理在测量CD以前先测量一般UV,选择合适的缓冲液,在,CD,测定时选择合适的缓冲液是非常重要。,缓冲液必需尽量透明,。大部份有意思的结构信息被发现在低波长,UV,。,这个波段也是一些缓冲液具有高吸收值会遮蔽,CD,讯号。对大部分工作而言,10mM,磷酸钾是一个很好的选择。我们可以用适当比例的,KH2PO4,及,K2HPO4,混合达到我们想要的,pH,值。千万不可以用,HCl,来调整,pH,。,在低,UV,波段氯离子会严重干扰,CD,测定。如果有需要辅助离子时不要使用,NaCl,，,可以用,Na2SO4,或,NaF,。,选择合适的缓冲液在CD测定时选择合适的缓冲液是非常重要。缓冲,比色池光径,选择合适光径的,CD,比色池,对于解决溶剂吸收问题将会非常有帮助。小一点光径,(,如：,0.1mm,或,0.05mm),液槽可以明显降低溶剂吸收并且可容许扫瞄到低波长。而这些液槽必需使用较高浓度的蛋白质，如约,1mg/ml,。,比色池光径选择合适光径的CD比色池对于解决溶剂吸收问题将会,20