,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第1页,研 究 背 景,WHO,发达国家,低、中等收入国家,1000,万,1900,万,死于心血管疾病患者数目,500,万,600,万,年，,271.6,万人死于,CVD,。,天天有,7420,人死于,CVD,，,11.6,秒死亡,1,例。,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第2页,罪犯斑块不在于斑块大小而是斑块结构、成份,斑块破裂,70%,急性心脏事件病理原因,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第3页,易损斑块形成过程及病理特征,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第4页,thin fibrous cap(65um),big lipid core,inflammatory,neoangiogenesis,易损斑块形成过程及病理特征,extracellular matrixde,gradation,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第5页,治疗现实状况,调脂、抗血小板聚集、介入性冠状动脉治疗、冠状动脉旁路移植术等血管再通治疗,不过每年仍有约两千万人死于急性心血管事件,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第6页,亟待处理问题,怎样稳定易损斑块，保护血管，是当前研究重点和难点,围绕机制，开发思绪，深入研究，使中医药在,AS,治疗彰显优势,中医药含有多靶点、多路径整体调整作用,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第7页,毒瘀,滋阴解毒活血,脂质,炎症反应,血管新生,痰,瘀,热毒,虚阴,中医,AS,病机认识,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第8页,滋阴解毒活血,四妙勇安汤,四妙勇安汤最早见于华佗,神医秘传,，曰,:“,内服药用,金银花三两，玄参三两，当归二两，甘草一两，,水煎服。”,清代医家鲍相敖将此方命名为“四妙勇安汤”，收载于,验方新编,中，含有,清养结合、毒瘀并驱,功效，清解络中之毒，化解络中之瘀，滋养络脉之体,临床应用：周围血管病、下肢闭塞性动脉粥样硬化、,冠心病,作用机制：抗凝、抗氧化、促血管内皮细胞增殖作用,动脉粥样硬化？路径？,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第9页,一、动脉粥样硬化易损斑块,模型建立,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第10页,1w,4w,经股动脉球囊拉伤术,开始予高脂饮食,100g/d,造模方法,牛血清白蛋白,250mg/kg,2w,取材,10w,维持高脂饮食,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第11页,经股动脉球囊拉伤术,左肾动脉,左髂总动脉,右肾动脉,右髂总动脉,主动脉弓,球囊（压力约为,2,个大气压）,左股动脉,备皮,插管,缝合,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第12页,评价指标,血脂,病理形态,纤维帽厚度,脂池面积,炎症因子,易损指数,新生血管,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第13页,试验结果,1.,复合造模对血脂及,ox-LDL,影响,造模后,TC,、,LDL-C,、,ox-LDL,成增高趋势。,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第14页,2.,复合造模对血清炎症因子水平影响,与对照组比较*,P0.01,造模原因干预后，血清炎症因子显著增高，,CRP,显著增高,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第15页,3.,复合造模对内膜影响,M,Z,HE,染色,(100,倍,),造模原因干预后，内膜显著增厚，纤维帽变薄,形成,AS,斑块,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第16页,4.,复合造模对脂核、易损指数影响,与对照组比较*,P0.01,VI=(ELA+CD68)/(CA+SMA),造模原因干预后，脂核增大，细胞外脂质增加，炎症细胞增多，平滑肌细胞降低，胶原纤维增多；易损指数增大,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第17页,Z,M,Z,M,Z,M,Z,M,造模原因干预后，脂核增大，细胞外脂质增加，炎症细胞增多，平滑肌细胞降低，胶原纤维增多；易损指数增大。,Masson,染色,(100,倍,),油红,O,染色,(400,倍,),CD68,免疫组化染色,(DAB,显色，,400,倍,),-SMA,免疫组化染色,(DAB,显色，,400,倍,),5.,复合造模对脂核、易损指数影响,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第18页,6.,复合造模对斑块内,CD31,及,VEGF,表示影响,CD31,造模原因干预后，斑块内可见内皮细胞组成连续或不连续小管腔,CD31,和,VEGF,表示呈强阳性。,VEGF,免疫组化染色,(DAB,显色，,400,倍,),Z,M,Z,M,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第19页,小 结,本试验模拟人,AS,发病机制综合各种原因，以高脂饲喂叠加,免疫生物损伤和内皮损伤复合原因制作模型，更靠近于,人体,AS,发生发展过程,经过对家兔血脂、血清炎症标志物及斑块病理形态、脂,质成份、炎症反应、血管新生、胶原含量、易损指数等,综合分析，证实建模成功,可操作性、重复性、稳定性、易于评价,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第20页,二、四妙勇安汤对,动脉粥样硬化易损,斑块内细胞外基质影响,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第21页,研究方法,易损斑块动物模型建立成功后，以辛伐他汀（,5mg/kg),作为阳性对照，观察四妙勇安汤对模型病理形态、易损指数、斑块内细胞外基质影响，明确其稳定斑块作用机制。,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第22页,斑块内,脂质含量,1,-SMA,，,MMP-9,，,NF-B,2,3,4,评价指标,胶原含量,（,CA,）,内中膜及,纤维帽厚度,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第23页,1.,四妙勇安汤对主动脉内膜及纤维帽影响,与正常组比较,P0.01,与模型组比较,P0.05,#P0.01,。,Z,M,X,S,模型组：内膜显著增厚,;,“,纤维帽,”,较薄,;,内皮个别脱落，大量脂质沉积，泡沫细胞,及炎性细胞浸润,;,中膜平滑肌降低，弹力板不连续，弹力纤维断裂溶解,给药组：内膜增厚，有少许泡沫细胞形成，内皮完整，中膜平滑肌增殖，弹力板尚,完整,HE,染色,100,倍,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第24页,2.,四妙勇安汤对斑块内脂质含量影响,模型组,ELA,LNA/PA,CD68,高于正常组，四妙勇安汤可降低易损指数，降低,LCA/PA,、,ELA,、,CD68,阳性面积百分比。,与正常组比较，*,P0.01,；与模型组比较，,P0.05,#P0.01,ELA(,油红,“,O,”,染色,),40,CD68,免疫组化染色,（,DAB,显色）,40,正常组,模型组,辛伐组,四妙组,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第25页,CA(Masson,染色,),40,-SMA,免疫组化染色,（,DAB,显色）,40,3.,四妙勇安汤对斑块内,CA,、,-SMA,影响,组别,n,CA,-SMA,正常组,10,0.680.29,16.77.80,模型组,8,9.891.48*,3.691.51*,辛伐组,10,18.673.60*,9.033.80,四妙组,10,18.294.37*,16.503.23,注：与正常组比较*,P0.01,与模型组比较,P0.05,P0.01,模型组斑块内,CA,高于正常组,-SMA,低于正常组，四妙勇安汤可升高斑块内,CA,、,-SMA,阳性面积百分比。,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第26页,4.,四妙勇安汤对斑块内,MMP-9,NF-B,影响,与正常组比较,P0.01,与模型组比较,P0.05,#P0.01,。,模型组斑块内,MMP-9,NF-B,蛋白表示显著增高，四妙勇安汤能够抑制,MMP-9,NF-B,蛋白表示,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第27页,讨 论,利用复合原因造模方法建立兔,AS,斑块模型，并从血脂、血清炎症标志物、主动脉病理形态、纤维帽厚度、斑块内炎症反应、脂质成份、血管新生、胶原含量、易损指数等方面综合分析，证实建模成功,依照动脉粥样硬化斑块不稳定,“,阴虚毒瘀,”,中医病机。利用含有滋阴活血解毒之功效四妙勇安汤对动脉粥样硬化模型兔进行干预，明确其稳定,AS,易损斑块作用机理,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第28页,四妙勇安汤可延缓血管壁病变进展，降低内膜厚度及脂核面积、增加纤维帽厚度,抑制降低斑块内脂质含量、使含有收缩功效平滑肌增多、增加胶原含量，从而降低易损指数，使斑块趋于稳定状态,讨 论,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第29页,讨 论,抑制斑块内细胞外基质降解,抑制,MMP-9,表示,可能与,NF-B,细胞信号通路相关,是否还包括到其它信号通路及通路上下游基因初步表示情况怎样还需要深入探讨,四妙勇安汤对动脉粥样硬化易损斑块内细胞外基质的影响及机制研究,第30页,