单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,CXL(,角膜胶原纤维交联术,),CXL(角膜胶原纤维交联术),讨论内容,1、取兔子眼睛过程,2、角膜交联术,3、交联术前后角膜变化,讨论内容1、取兔子眼睛过程,讨论内容,1,、取兔子眼睛过程,2,、角膜交联术,3,、交联术前后角膜变化,讨论内容1、取兔子眼睛过程,取兔子眼角膜,取兔子眼角膜,取兔子眼角膜,取兔子眼角膜,取兔子眼角膜,取兔子眼角膜,取兔子眼角膜,取兔子眼角膜,取兔子眼角膜,取兔子眼角膜,取兔子眼角膜,取兔子眼角膜,取兔子眼角膜,取出的角膜保存在生理盐水中并放入冰盒,取兔子眼角膜取出的角膜保存在生理盐水中并放入冰盒,讨论内容,1,、取兔子眼睛过程,2,、角膜交联术,3,、交联术前后角膜变化,讨论内容1、取兔子眼睛过程,CXL,：利用紫外线,A,（,UVA,）和光敏剂核黄素使角膜胶原之间发生交联，增强角膜生物力学稳定性。,Spoerl E,Huhle M,Seiler T.Induction of cross-links in corneal tissue.Exp Eye Res.1998,66:97-103,CXL：利用紫外线A（UVA）和光敏剂核黄素使角膜胶原之间发,核黄素,+370nm,紫外线,核黄素分子被激发到,三线态,，产生以,单线态氧,为主的,活性氧族,活性氧族与各种分子发生反应诱导胶原纤维的,氨基（团）,之间发生,化学交联反应,（,型光化学反应）,导致胶原纤维的机械强度和抵抗角膜扩展的能力增强,Wollensak G,Crosslinking treatment of progressive kenatoco-conus.Newhope.Curr Opin Ophthalmaol,2006,17:356-360,核黄素+370nm紫外线Wollensak G,Crossl,讨论内容,1,、取兔子眼睛过程,2,、角膜交联术,3,、交联术前后角膜变化,讨论内容1、取兔子眼睛过程,HE,染色：观看,CXL,前后角膜组织分层及结构变化,正常角膜显微观察,CXL,后,1,天角膜显微观察,HE染色：苏木精 伊红染色法(hematoxylin-eosin staining)，石蜡切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外中的成分着红色。,李刚.核黄素_紫外线A胶原交联对角膜胶原纤维重塑及生物力学稳定性的影响R.军医进修学院解放军总医院.2012.5,HE染色：观看CXL前后角膜组织分层及结构变化正常角膜显微观,TUNEL,（原位末端标记）法检验细胞凋亡：,蓝色：未凋亡,棕色：凋亡,正常角膜上皮细胞和基质细胞未凋亡,CXL,后,1,天角膜,角膜上皮细胞和基质细胞凋亡,老师在周计划中所提到的PBS-phosphate buffered saline（磷酸盐缓冲液）是TUNEL法检验所用的一种试剂。,李刚.核黄素_紫外线A胶原交联对角膜胶原纤维重塑及生物力学稳定性的影响R.军医进修学院解放军总医院.2012.5,TUNEL（原位末端标记）法检验细胞凋亡：正常角膜上皮细胞和,角膜基质细胞是角膜基质中的主要细胞，其合成胶原蛋白分子与细胞外基质来维持角膜透明性和生物力学强度，,CXL,治疗中角膜基质细胞凋亡有何意义？,角膜基质发生何种变化并对角膜的生物力学性质产生什么影响？,角膜基质细胞是角膜基质中的主要细胞，其合成胶原蛋白分子与细胞,苦味酸天狼星红染色：,型胶原纤维：红色或黄色,型胶原纤维：绿色,正常角膜,CXL,后,1,天角膜,CXL,后,1,周角膜,CXL,后,4,周角膜,苦味酸天狼星红染色：正常角膜CXL后1天角膜CXL后1周角膜,角膜的机械性能有赖于胶原纤维的特征纤维间连接类型及其空间排列结构，不同类型胶原纤维比例,?,现实验中常采用,酶促法,使角膜胶原纤维变化来降低角膜的机械强度，与,正常角膜,和,CXL,处理角膜,做机械强度对比。,角膜的机械性能有赖于胶原纤维的特征纤维间连接类型及其空间排列,