单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,核酸检测实验室建立与应用,核酸检测实验室建立与应用,2024/11/17,2,核酸扩增检测实验室的建立,人员,场地,检测方法选择,实施方案,依据：卫生部颁发的,临床基因扩增检验实验室管理暂行办法,（卫医发,200210,号）,2023/9/112核酸扩增检测实验室的建立人员,2024/11/17,3,核酸实验室人员要求,资质,:,经过临检中心,PCR,培训班培训并取得上岗证；通过血站核酸实验室岗前培训考试合格。,培训,:,无”核酸”的概念形成,防污染的概念,良好工作习惯的培养,.,报告的正确发放,.,后备人员的培养,.,2023/9/113核酸实验室人员要求资质:经过临检中心PC,2024/11/17,4,试剂准备区,标本制备区,扩增区及扩增产物分析区,样本离心交接区,报告发放区,核酸实验场地,2023/9/114试剂准备区标本制备区扩增区及扩增产物分析,2024/11/17,5,方法选择,:TMA,与,PCR,2023/9/115 方法选择:TMA与PCR,2024/11/17,6,TMA,的优点 缺点,自动化程度高,灵敏度高,扩增效率高：,10,n,不能绝对定量,2023/9/116 T,2024/11/17,7,PCR,的优点 缺点,易于自动化,灵敏度高,扩增效率高,汇集拆分过程繁琐,拆分可减低非反应性比率,2023/9/117 P,2024/11/17,8,核酸试剂质控,试剂的确认,试剂运输过程的控制,(,温度,条件,时限,),灵敏度的要求,内标的要求,试剂涵盖的基因型,2023/9/118核酸试剂质控试剂的确认,2024/11/17,9,检测流程,(1):,常规筛查合格汇集标本检测流程,2023/9/119检测流程(1):常规筛查合格汇集标本检测,2024/11/17,10,检测流程,(2):,常规筛查合格单人份标本检测流程,2023/9/1110检测流程(2):常规筛查合格单人份标本,2024/11/17,11,检测流程,(3):,平行检测流程,样本清点交接,核酸单份检测,常规检测,合格标本,不合格标本,阴性标本,反应性标本,合格标本发布结果,单项目反应性,无反应性,阳性或可疑结果淘汰,阳性或可疑结果淘汰,2023/9/1111检测流程(3):平行检测流程样本清点交,2024/11/17,12,标准操作规程,(SOP),的编写,核酸实验室设置与管理规范,核酸实验室标本检测流程,核酸实验室岗位职责,核酸实验室关键试剂管理规范,核酸实验室仪器设备管理规范,核酸实验室检测标本管理规范,核酸实验室室间质量评价规范,核酸实验室记录管理制度,核酸实验室生物防护规范,核酸反应性献血者追踪规程,核酸实验室检测应急措施,2023/9/1112标准操作规程(SOP)的编写核酸实验室,2024/11/17,13,标准操作规程,(SOP),的编写,核酸标本离心交接操作规程,核酸标本提取及汇集操作规程,(,科华,),核酸标本扩增检测操作规程（科华）,核酸标本全自动检测分析系统操作规程（,CHIRON,）,核酸标本检测报告发布操作规程（唐山软件）,核酸标本检测复检操作规程,生物安全柜标准操作规程,可移动紫外线灯标准操作规程,低温高速离心机标准操作规程,ABI 7300,型核酸扩增荧光检测仪标准操作规程,2023/9/1113标准操作规程(SOP)的编写核酸标本离,2024/11/17,14,核酸实验室防,污染措施,主要的污染源,扩增产物,标本之间产生的气溶胶,操作人员,手,衣服,2023/9/1114 核酸实验室防污染措施主要的污染源,2024/11/17,15,核酸实验室防,污染措施,要有独立的空气处理系统,.,各区始终处于完全分隔的状态，不能有空气的直接相通,实验室保持合理的通风,对各区内的设备、物料进行标示，专区专用；其他物品不得混用（例如：笔、纸张）,空气：试剂准备区,标本制备区,扩增区,产物分析区,试剂阳性对照储存在标本制备区,使用带滤芯的吸头,2023/9/1115核酸实验室防污染措施要有独立的空气处理,2024/11/17,16,核酸实验室防,污染措施,使用外排式的生物安全柜,自配试剂应分装成小规格，未用完的试剂应废弃,使用次氯酸钠溶液消毒（台面、地面）,使用,1mol/L,的,HCL,溶液（吸头）,使用紫外线照射（空气和台面）,使用无水乙醇溶液（空气喷雾）,2023/9/1116核酸实验室防污染措施使用外排式的生物安,2024/11/17,17,核酸实验室,污染后措施,实验室污染后，如何处理？,通风,次氯酸钠溶液（扩增区不宜使用）,HCL,溶液（吸头）,紫外线（固定、移动）,酒精喷洒（空气）,应设计有备用实验室,:,如开设独立的报告发放区作为备用,2023/9/1117核酸实验室污染后措施实验室污染后，如何,2024/11/17,18,中心理念：监测全程的实验过程包含病毒核酸提取、反转录及扩增过程的效率。,血筛核酸检测的内标的作用,内标的作用,质控整个反应。,提示假阴性检测结果。,监控反应的外部条件,内标浓度要合适,保持适度的内标失控,.(ChiSq,Intercept 1 -4.6852 1.5659 -7.7542 -1.6161 8.95 0.0028,l,og10(Dose)1 4.8000 1.4699 1.9190 7.6810 10.66 0.0011,应用,SAS9.0,软件,PROBIT,分析结果,2023/9/1121,2024/11/17,22,Probit Analysis on Dose,Probability Dose 95%Fiducial Limits,0.50 9.57017 5.12038 15.55110,0.55 10.63175 6.02869 17.84047,0.60 11.83113 7.02737 20.77334,0.65 13.21316 8.12392 24.64098,0.70 14.84467 9.33581 29.90750,0.75 16.83205 10.69944 37.36963,0.80 19.35973 12.28641 48.54111,0.85 22.78900 14.24179 66.74000,0.90 27.97953 16.90417 101.07479,0.91 29.40116 17.58727 111.93157,0.92 31.02755 18.34915 125.13015,0.93 32.91988 19.21204 141.54165,0.94 35.17006 20.20878 162.54851,0.95 37.92474 21.39086 190.49822,2023/9/1122,2024/11/17,23,2023/9/1123,2024/11/17,24,阳性献血者的追踪,沟通原则,:,专业授权、人性化、保密、尊敬。,沟通方式：电话、面谈,沟通技巧：表扬和鼓励、合理解释、知情、适当的问候,2023/9/1124阳性献血者的追踪沟通原则:专业授权、人,2024/11/17,25,献血者核酸检测不合格解释,由于核酸检测方法目前尚不能排除假阳性，对实验过程要求极高，另外乙肝和丙肝病毒进入人体后，人体又有清除现象，但血液不能用于临床，因此核酸检测不合格血液仅表示该血液不能用于临床输血。,不作为献血者健康体检指标。,更不宜作为疾病诊疗指标。,献血者献血权利仍保留。,2023/9/1125献血者核酸检测不合格解释 由于核酸检测,2024/11/17,26,关于核酸检测的解释,汇集结果成反应性,拆分结果为阴性,.,内标失败,.,ELISA(+),核酸结果为,(-),ELISA(-),核酸结果为,(+),核酸单检结果反应性与血液发放,.,化学发光法与核酸检测,.,2023/9/1126关于核酸检测的解释汇集结果成反应性,拆,2024/11/17,27,1.,灵敏度：汇集池大小要满足灵敏度要求。,灵敏度太低，病毒低载量献血者漏检。,HBV DNA,灵敏度宜,50,拷贝,/ml.,2.,引物是否有效性,能否检测亚型和突变株感染。,3.,假阳性，防污染措施（血筛主要要防止,RNA,酶的污染）。,4.,核酸提取效率与自动化,.,5.,需要规范化场地和高素质的操作人员,.,6.,参加国际间室间质控,提高检测水准,.,血液核酸筛查注意的问题,2023/9/1127血液核酸筛查注意的问题,2024/11/17,28,深圳血液中心核酸检测概况,对,161228,人份酶免疫检测结果阴性标本进行核酸检测，共检出,33,例不相同,HBV DNA,阳性献血者，总比率为,1,：,4885,。,检出,anti-HCV,阴性、,HCV RNA,阳性,1,例，定量结果为,1.210,5,IU/ml,。,3,个月后追踪结果发现,anti-HCV,（,+,），,ALT,由正常升高至,700U/L,。,2023/9/1128深圳血液中心核酸检测概况对161228,2024/11/17,29,深圳血液中心核酸检测概况,2023/9/1129深圳血液中心核酸检测概况,2024/11/17,30,HBV DNA,阳性献血者追踪情况,对,17,位,HBV DNA,阳性献血者进行了追踪，,9,位献血者发生血清转换现象。,4,例呈窗口期特征（或部分），,2,例献血者发现病毒感染后自愈现象,1,例献血者原为乙肝大三阳患者，经治疗后,HBsAg,转阴后，献血，常规检测为合格，核酸检测,HBV DNA,（,+,），经追踪后,HBsAg,变为阳性,2023/9/1130HBV DNA阳性献血者追踪情况 对1,2024/11/17,31,2023/9/1131,2024/11/17,32,2023/9/1132,2024/11/17,33,2023/9/1133,2024/11/17,34,2023/9/1134,2024/11/17,35,2023/9/1135,2024/11/17,36,HBV DNA,检测阳性献血者追踪概况,2023/9/1136 HBV DNA检测阳性献血者追踪概况,2024/11/17,37,1,号献血者在追踪时表明曾经是大三阳,治疗转阴后献血,被核酸检出阳性,7,天后,HBsAg,检测,(+).,2023/9/1137 1号献血者在追踪时表明曾经是大三,2024/11/17,38,2023/9/1138,2024/11/17,39,1.Pooling by STAR processor,2.Virus enrichment by centrfugation,3.Extracted by KHB-1000,4.Amplified and detected by ABI7300,2023/9/11391.Pooling by STAR p,2024/11/17,40,2023/9/1140,2024/11/17,41,1.pooling and extraction by STAR LET,2.Amplification and detection by ABI7300,Automation process,2023/9/11411.pooling and extra,2024/11/17,42,2023/9/1142,2024/11/17,43,2023/9/1143,2024/11/17,44,2023/9/1144,感谢聆听！,感谢聆听！,