,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,病原生物学教研室,病原生物学实验（二）,实验目的,1,掌握常用的细菌接种方法,2,熟悉细菌生长现象的观察方法,接种工具,接种针和接种环,L,型涂布棒,接种环境,接种罩、超净工作台或无菌室内进行。,接种方法,1.,平板划线接种法,：,目的：,使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。,方法：,分区划线法：适用于含菌量较多的标本。,连续划线法：适用于含菌量较少的标本。,分区划线,划线时接种环与平皿约成,30-40,度角,轻轻接触,以腕力在琼脂表面,轻快滑动,不能划破琼脂,.,第一次划线应占平皿面积的,1/10,以后每次划线约占面积的,1/41/5,.,划线为连续划线,不能间断,.,应占满平皿,.,划线不能交叉重复,.,每次划完后应灭菌,.,2,.,斜面接种法：,用于菌种移种，以进一步鉴定,和保存菌种。,3.,半固体穿刺接种法：,保存菌种或观察细菌的动力和生化反应。,4.,液体接种法：,用于肉汤、蛋白胨水、糖发酵管等液体培养基的接种。,四种接种方法,将上述已接种细菌的培养基置,37,恒温培养箱中孵育,18,24h,，观察细菌的生长现象。,（二）细菌在培养基上的生长现象,1.,细菌在,固体,培养基中的生长现象,菌落,定义：指,单个细菌,在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的,细菌集团,。,菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性,。,菌苔,：,指,多个菌落,融合在一起形成的,细菌堆积物,。,菌落与菌苔,菌落,菌苔,2.,细菌在,液体,培养基中的生长现象,浑浊,：大多数细菌，如,E.c.,沉淀,：多见于链状排列的细菌。,菌膜,：专性需氧菌（如结核分枝杆菌、枯草杆菌）。,细菌在液体培养基中的生长现象,菌膜,菌沉淀,均匀浑浊,对照,3.,细菌在,半固体,培养基中的生长现象,有鞭毛细菌：,在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线,边缘模糊,。,无鞭毛细菌：,只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰,。,细菌在半固体培养基中的生长现象,有动力,现象,无动力,现象,肠道致病菌的分离培养,(1),一.肠道杆菌的生物学性状,二.S-S培养基的特性及用途,三.分离培养方法,主要内容,（一）肠道杆菌的生物学性状,埃希菌属：大肠埃希菌,沙门菌属：伤寒沙门菌,甲型、乙型、丙型副伤寒,志贺菌属：痢疾志贺菌,肠杆菌科,的,重要菌属及代表菌种,1.,相似的形态染色,从形态上无法区别,中等大小的,G,-,杆菌,多有鞭毛、菌毛,乳糖发酵试验,肠道致病菌,肠道非致病菌,多数不发酵乳糖,多数发酵乳糖,2.活泼的生化反应,初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌,+,/,-,-,+,伤寒杆菌,-,-,+,痢疾杆菌,-,大肠杆菌,硫化氢,乳糖,葡萄糖,菌名,三种细菌的生化反应,成 分,含量（,g/L,）,作 用,牛肉膏,5,营养成分,乳糖,10,营养成分，发酵,蛋白胨,5,营养成分,胆酸钠、胆酸,-,脱氧胆酸钠盐混合物（三号,）,3.5,抑制,G+,、大部分大肠菌群和变形杆菌,柠檬酸钠,8.5,抑制,G+,、大部分大肠菌群和变形,0.1%,煌绿溶液,0.33ml,抑制,G,+,、大部分大肠菌群和变形,硫代硫酸钠,8.5,检测硫化氢的产生,10%,柠檬酸铁溶液,10ml,检测硫化氢的产生,1%,中性红溶液,2.5ml,指示剂,琼脂,17,凝固剂,（二）SS培养基 （Salmonella Shigella Agar）,胆盐抑制,G,+,枸橼酸钠和煌绿能部分抑制大肠杆菌,致病的沙门菌和志贺菌能大量生长。,中性红指示剂和乳糖,中,性红遇酸变粉红。,常用于肠道致病菌的分离培养。,（,二）SS培养基,细 菌,SS,平板,大肠杆菌,粉红色,大菌落,痢疾杆菌,无色细小，半透明菌落,伤寒杆菌,无色细小 半透明菌落,(,中间有黑色沉淀）,SS培养基中菌落特点,将粪便标本以平板分区划线法接种到SS培,养基。,(每个实验室8个SS平板，每组做好标记，班长用胶布按班级绑好),放入37温箱中培养24h；取出放4冰箱中保存备用。,（三）粪便标本的分离培养,1.,空气中细菌的检查（,每个班,2,个平皿,）,原理：,根据空气中携带有微生物气溶胶（以固体或液体微小颗粒分散于空气中的分散体系称为气溶胶，其中的气体是分散介质）粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上。,方法：,在室内选择一处放一个平皿。揭开皿盖，皿盖扣置于皿底下，暴露,放置,15min,，即盖上皿盖，放入,37,培养,24,小时，观察结果。,细菌在自然界的分布,2.,紫外线对细菌的影响,（每个实验室2个培养皿）,取一个平皿，用密涂法将细菌涂布于培养皿中，打开一半平皿盖，置于紫外灯下照射,30,分钟，然后盖好平皿，置,37,培养,24h,后取出观察结果。,密涂接种,分三次接种，每次取一环。第一次密涂接种后旋转,60,度二次密涂接种，然后同方向旋转,60,度后再次密涂接种。,3.,咽喉部细菌的检查（,每班,4,个平皿,）,取血琼脂平板,1,块，打开平皿盖，将培养基面置于口腔前,10cm,处，受试者用力咳嗽几次；,盖上平皿盖，置,37,温箱中倒置培养,24h,后取出观察结果,。,4.,化学消毒剂对细菌的影响,方法,：,取一普通平皿培养基，,一部分写上,“,前,”,，另一部分,写上,“,后,”,，然后将手指在写,有,“,前,”,的部分沾一下，再将,手指用酒精进行消毒，在写,有,“,后,”,的部分沾一下。放入,37,温箱培养,24,小时,后观察。,（每个实验室,4,个平皿）,5.,自选细菌进行培养,(4,个,),方法,：,取一普通平皿培养基，用棉签沾取生理盐水后，在手机、台面等物品上擦拭，然后涂布在平板上。,下次实验,细菌的形态学检查,药敏试验,肠道致病菌分离培养,