单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,1/7/2022,#,兽药残留的测定,兽药残留的测定,第1页,一,.,兽药残留与危害,经典兽药是指用于预防和治疗畜禽疾病药品。不过，伴随集约化养殖生产开展，,一些化学、生物药用成份,被开发成含有一些功效,动物保健品或饲料添加剂,，也属于兽药范围。,兽药主要用途有防病治病、促进生长、提升生产性能、改进动物性食品品质等。,兽药残留是指动物性产品任何可食个别含有兽药母化合物或其代谢物。,兽药残留的测定,第2页,一,.,兽药残留种类与危害,兽药最高残留限量,(MRLVD),是指某种兽药在食物中或食物表面产生最高允许兽药残留量,(,单位,g,kg,，以鲜重计,),。,兽药残留,主要是因为各种正常见药和药品滥用造成。,另外，休药期,(,是指自停顿给药到动物获准屠宰或其动物性产品获准上市间隔时间,),过短，是造成动物性食品兽药残留过量另一个主要原因。,兽药残留的测定,第3页,兽药在动物性食品中残留,兽药原形化合物及其代谢物在动物细胞、组织、器官或可食性产品（如奶、蛋）中蓄积、贮存，称为食品动物兽药残留。,（狭义）化学物,(Chemicals),残留：除兽药外还包含经过食物链进入动物体内农药（如杀虫剂、除草剂等）和环境污染物,(,如重金属、霉菌毒素等,),。（广义）,兽药残留的测定,第4页,在生产中大量使用抗菌药品、抗寄生虫药品及各种促生长制剂，这些药品都会以原形或以有活性代谢产物形式随动物粪便、尿液或其它排泄物进入环境。,这些物质在环境土壤、微生物、水生生物、植物等蓄积或贮存。,兽药在生态环境中残留,兽药残留的测定,第5页,兽药残留产生,产生路径,兽药和添加剂使用,防治动物疫病,使用药品添加剂,环境污染物,兽药残留的测定,第6页,不恪守休药期要求,标签外用药,:,剂量、剂型、给药路径、疗程、适应症、动物,非法使用违禁药品,克伦特罗、己烯雌酚等,污染,饲料加工、贮藏、运输,兽药残留产生主要原因,兽药残留的测定,第7页,兽药残留毒性,急性毒性作用,慢性毒性作用,特殊毒性作用,病原菌耐药性,对胃肠道菌丛影响,兽药残留的测定,第8页,急性毒性,克伦特罗（瘦肉精）中毒,慢性毒性,氯霉素、氨基糖苷类、灰黄霉素等,兽药残留的测定,第9页,雌激素类（己烯雌酚）、同化激素（苯丙酸诺龙）,喹恶啉类（卡巴氧）,硝基呋喃类（呋喃西林、呋喃他酮）,砷制剂,苯并咪唑类,杀虫剂（,666,）,氯羟吡啶、,SM2,等,甲醛、苯酚等,特殊毒性（“三致作用”）,兽药残留的测定,第10页,激素样作用,对内分泌功效影响,对生育能力影响,儿童性早熟,过敏反应,青霉素类、四环素类、磺胺类等,兽药残留的测定,第11页,对人类肠道微生物影响,破坏或抑制人体胃肠菌群中敏感菌生长。,造成条件性病原菌大量繁殖或体外病原菌侵入肠道。,改变肠道菌群代谢活性，使菌群改变药品和食物固有活性和毒性生物转化能力发生改变。,引发细菌耐药性产生，造成人类感染性疾病治疗失败。,兽药残留的测定,第12页,二,.,常见兽药残留种类,1,抗生素类药品,这类药品,多为天然发酵产物,，是临床应用最多一类,抗菌药品,，如青霉素类、氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类、螺旋霉素、链霉素、土霉素、金霉素等。青霉素类最轻易引发超敏反应，四环素类、链霉素有时也能引发超敏反应。轻至中度超敏反应普通表现为短时间内出现血压下降、皮疹、身体发烧、血管神经性水肿、血清病样反应等，极度超敏反应可能造成过敏性休克甚至死亡。长久摄入含氨基糖苷类残留超标动物性食品，可损害听力及肾脏功效。,兽药残留的测定,第13页,2,磺胺类药品,主要用于抗菌消炎，如磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺眯、菌得清、新诺明等。多年来，磺胺类药品在动物性食品中残留超标现象，在全部兽药当中是最严重。长久摄入含磺胺类药品残留动物性食品后，药品可不停在体内蓄积。,兽药残留的测定,第14页,磺胺类药品毒性作用,损害泌尿系统,磺胺类药主要经肾脏排出，在尿中浓度较高，其溶解度又较低，尤其当尿液偏酸性时，可在肾盂、输尿管或膀胱内析出结晶，产生刺激和阻塞，造成泌尿系统损伤，引发结晶尿、血尿、管型尿。,引发过敏反应,抑制造血系统,造成细菌产生抗药性,兽药残留的测定,第15页,磺胺类药品结构,磺胺类药品基础结构为对氨苯磺酰胺，简称磺胺衍生物，含有芳氨基和磺酰胺基，多为两性化合物。,常见磺胺类药品化学结构式,：,兽药残留的测定,第16页,磺胺类药品分子结构,兽药残留的测定,第17页,磺胺类药品在兽医临床上应用,磺胺药对大多数革兰氏阳性和阴性细菌都有抑制作用，在食源性动物喂养中，磺胺类药品不但作为兽药被广泛用于兽医临床对细菌感染性疾病防治，有时也被用作饲料添加剂。,磺胺药药代动力学,磺胺药主要在肝脏中代谢，常见方式是在对位氨基处发生乙酰化，其次是羟基化作用。有磺胺药其乙酰代谢物水溶性低，易在肾小管内析出结晶，而有些代谢物虽水溶性较高，但在酸性尿中也轻易结晶析出，轻易引发结晶尿和肾并发症。,兽药残留的测定,第18页,磺胺类药品对食品污染,使用过磺胺类药品动物，假如不恪守适当休药期，其肌肉组织、蛋和奶中就会被残留磺胺类药品污染；短期大剂量或长久小剂量给药，很轻易造成磺胺类药品在动物各组织中蓄积；,当饲料或饮水被磺胺类药品污染后，也可造成动物性食品中磺胺类药品残留量严重超标；,很多研究表明猪肉及其制品中磺胺药品超标现象时有发生，尤其是致癌性磺胺二甲基嘧啶残留给人类健康带来了威胁。,兽药残留的测定,第19页,食品中磺胺类药品最高残留限量,英、美等国家对磺胺类药品在肉类及乳品中允许残留量限制为,100 g,kg,-1,；,欧盟第,675/92,号令中要求了，在肉类及牛奶中磺胺最大残留总量不得超出,100 gkg,-1,；,日本要求最高残留限量更严格，单个磺胺残留限量为20 g,kg,-1,，最大残留总量不得超出,100 gkg,-1,；,我国对磺胺类药品在肉类及乳品中允许残留量限制为,100 g,kg,-1,。,兽药残留的测定,第20页,提取和净化方法,磺胺类药品不易溶于非极性溶剂，而在极性较大溶剂中溶解性很好，普通常见乙睛、氯仿、二氯甲烷、丙酮、或乙酸乙酯提取。,净化方法主要有柱色谱，,TLC,，液液萃取（,LLE,），固相萃取（,SPE,）和基质固相分散萃取（,MSPD,）等。,兽药残留的测定,第21页,磺胺类药品,HPLC,法色谱条件,常采取反相硅胶柱对待测物进行分离，主要有,C18,，,C8,或者,C4,柱，有时也采取离子对色谱柱。,流动相主要由乙睛,-,水，甲醇,-,水或者乙睛,-,甲醇,-,水按不一样百分比组成，也有文件报道采取乙醇,-,水系统。在以上流动相系统中加入适量乙酸或者十二烷基磺酸钠（,SDS,）常见于提升分离效率。,兽药残留的测定,第22页,磺胺类药品,HPLC,法色谱条件,磺胺类药品在色谱柱上保留值不但受流动相极性影响，还会受磺胺类药品解离形式影响，所以，流动相,pH,值对色谱分离效果起主要作用。,检测方法主要有,UV,，,FLD,，,DAD,，或者,MS,。其中,UV,检测器是最常见检测方法，波长普通在,270-280 nm,，有时用,255 nm,。荧光检测（,FLD,）激发波长普通为,405-420 nm,，发射波长普通为,485-495 nm,。二极管阵列检测（,DAD,）常采取,267,、,268,或,263 nm,。,MS,因为其高特异性，普通用于确证试验。,兽药残留的测定,第23页,3,硝基呋喃类药品,主要用于抗菌消炎，如呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等。经过食品摄入超量硝基呋喃类残留后，对人体造成危害主要是胃肠反应和超敏反应。剂量过大或肾功效不全者，可引发严重毒性反应，主要表现为周围神经炎、嗜酸性白细胞增多、溶血性贫血等。长久摄人可引发不可逆性末端神经损害，如感觉异常、疼痛及肌肉萎缩等，我国还未制订硝基呋喃类药品残留检测标准。,兽药残留的测定,第24页,4,抗寄生虫类药品,这类药品主要用于驱虫或杀虫，如苯并咪唑、左旋咪唑、克球酚、吡喹酮等。而常见苯并咪唑类抗寄生虫药品有丙硫苯咪唑、丙氧咪唑、噻苯咪唑、甲苯咪唑、丁苯咪唑等。,食用残留有苯并咪唑类药品动物性食品，对人主要潜在危害是致畸作用和致突变作用。对于妊娠期孕妇有可能发生胎儿畸形，如短肢、兔唇等；对全部消费者来说，可能因为其致突变作用使消费者发生癌变和性染色体畸变，从而其后代有发生畸形危险。,兽药残留的测定,第25页,5,激素类药品,这类药品主要用于提升动物繁殖和加紧生长发育速度，使用于动物激素有性激素和皮质激素，而以性激素最常见，如孕酮、睾酮、雌二醇等。正常情况下，动物性食品中天然存在性激素含量是很低，因而不会干扰消费者激素代谢和生理机能。,但摄人性激素残留超标动物性食品，可能会影响消费者正常生理机能，并含有一定致癌性，可能造成儿童早熟、儿童发育异常、儿童异性趋向等。,兽药残留的测定,第26页,三,.,兽药残留分析技术概述,兽药残留分析技术特点,待测物质浓度低,样品基质复杂，干扰物质多,兽药残留代谢产物多样或不明,动物种类多样，对药品代谢存在差异,兽药残留的测定,第27页,对检测方法要求,快速,高通量,(high throughput),定量,准确度和准确度,(accuracy&precision),确证,(unequinocal identification),法定和,QC,兽药残留的测定,第28页,理想仪器装备,样品经简单处理即可上机测定,不需萃取和净化,快速、准确定量分析,自动资料处理,兽药残留的测定,第29页,分析方法总体思绪,高水平,(Level),方法,确证和定量被分析物质,中等水平,(Level),方法,定量但不需要确证被分析物质,低水平,(Level),方法,筛选,兽药残留的测定,第30页,四,.,兽药残留分析与监测,残留分析样品,样品前处理,残留检测方法,采样与样品制备,（样品预处理）,提取,净化,浓缩,衍生化,分辨,检测,样品处理,测定,分离,残留分析原理,兽药残留的测定,第31页,残留分析样品,可食性组织及产品,肝、肾、肌肉、脂肪、皮肤、血液,奶、蛋,其它加工食品,其它,毛发、尿、粪便等,兽药残留的测定,第32页,取样方法,代表性标准、随机采样,各种标准要求,活体检测,普通采集毛发、血液、尿液和粪便,屠宰场取样,药品靶组织,其它高浓度样本：肝、肾、胆汁、注射部位,排泄物：尿液,样本搜集,兽药残留的测定,第33页,样本贮存,容器材料,普通为玻璃或塑料,硅烷化处理预防器皿壁对痕量残留组分吸附,塑料吸附脂溶性物质,玻璃表面吸附碱性物质,预处理,匀化、缩分、过筛、离心、过滤、防腐、抑制降解等,贮存温度要求,兽药残留的测定,第34页,食品中磺胺类兽药残留液相色谱测定,样品处理,1.,称取,5.0 g,匀浆样品和,10 g,经煅烧无水硫酸钠，于,50 mL,二氯甲烷，均质提取,1min,，,3000r/min,离心,2 min,上清液经快速滤纸过滤到,200 mL,浓缩瓶中，用,25 mL,二氯甲烷重复提取一次，合并二氯甲烷，,35,水浴氮气吹干。上述残渣用,1.0 mL 1%,（,v/v,）乙酸,-,甲醇（,65+35,）溶解，漩涡混匀，转移至,5 mL,离心管中，加,3 mL,正己烷，漩涡混匀，静置分层，弃上层正己烷层，再加入,3 mL,正己烷，涡漩混匀，,3000r/min,离心,2 min,下层用,0.45 m,有机滤膜过滤，供液相色谱测定。基质干扰大样品，需要固相萃取柱以下净化步骤。,兽药残留的测定,第35页,2.,下层加,5%,（,v/v,）乙酸溶液稀释至,3 mL,，稀释液注入预先分别用,3 mL,甲醇和,3 mL 5%,乙酸溶液处理,Oasis HLB,型固相萃取柱，用,2 mL 5%,乙酸甲醇（,50+50,）淋洗，最终用,10 mL 5%,氨甲醇溶液洗脱，洗脱液,40,减压旋转蒸发至干，残渣用,1 mL,甲醇定容，供液相色谱测定。,兽药残留的测定,第36页,色谱条件,色谱柱：,ODS-C18(