单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,检验科 余素飞,血培养的规范化操作,降低污染，提高阳性率,检验科 余素飞血培养的规范化操作,1,一、血培养送检的临床重要性,二、血培养样本的采集,三、血培养样本的运送,四、与临床的沟通、常见问题解答,五、趣味题,一、血培养送检的临床重要性,2,精品资料,精品资料,3,你怎么称呼老师？,如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你是否会认为老师的教学方法需要改进？,你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？,教师的教鞭,“不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我笨，没有学问无颜见爹娘”,“太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早”,血培养的规范化操作-课件,4,一、血培养的临床重要性,诊断重要性,：,血培养阳性是评估或确认患者患有感染的重要依据,为抗生素敏感试验提供了病原学依据，从而使得抗生素治疗达到优化,一、血培养的临床重要性诊断重要性：,5,预后重要性,从预后角度看，分离到具有重要临床意义病原菌的血培养意味着宿主的防御机制，和（或）以往的临床治疗手段不能将原发部位感染的病原菌清除。,预后重要性,6,二、血培养样本的采集,采集前总体要求,血培养的采集程序,血培养的送检指征,采集时机,采集最佳方案,二、血培养样本的采集采集前总体要求血培养的送检指征,7,血液培养的送检指征,症状指征,：,发热（,38,）、皮疹、肝脾肿大、关节疼痛、神志不清、昏迷或休克。,血液培养的送检指征,8,疾病指征：,血液疾病、恶性肿瘤、呼吸道感染、呼吸衰竭、导管介入疾病、血液透析患者、糖尿病、艾滋病、肝脏疾病、长期输液、化脓性病灶或损害、粘膜损伤性疾病。,疾病指征：,9,一般情况,：,患者出现寒战，体温升高之前。,使用抗菌药物之前，应立即采集,血培养。,若病人已服药，应在第二次服药,前采血。,采集时机,一般情况：采集时机,10,采集时机,不明原因发热：,例如：隐性脓肿、伤寒热和波浪热,先从不同体位采集,2-3,次血标本,间隔大于或等于,1h,，,24-36h,后估计体温升高之前再采集,2,份以上,若,24h,培养结果阴性，应重新采集血标本,采集时机 不明原因发热：,11,采集时机,沙门菌感染患者血培养采集：,根据不同的病程、病原体存在部位不同，,发病早期（第,1-2,周）,采集血液标本可获得,80%-90%,的阳性率,，之后血培养阳性率也将下降。,采集时机 沙门菌感染患者血培养采集：,12,采集时机,急性心内膜炎或亚急性细菌性心内膜炎血培养采集,：,怀疑,急性心内膜炎,时，应在抗生素治疗前,1-2h,内分别从,3,个不同部位，间隔,15min,，采集,3,份标本，分别进行培养。,采集时机 急性心内膜炎或亚急性细菌性心内膜炎血培养采集：,13,怀疑,亚急性细菌性心内膜炎,时，应在抗生素治疗前,1-2h,内分别在,3,个不同部位采集血标本进行培养，间隔,15min,，,若,24h,培养阴性，重新采集,2-3,份或更多标本送检。,怀疑亚急性细菌性心内膜炎时，应在抗生素治疗前1-2h内分别在,14,认清各种类型的血培养瓶,标准需气瓶和厌气瓶,优良的品质,经济,可加入 10,ml,血液或体液标本,FAN,需氧/厌氧中和抗生素瓶,中和抗生素能力（活化碳粉）,培养基营养成份更丰富,最多可容纳10,ml,血液/体液标本,小儿需氧瓶,可中和抗生素,可加入 4,ml,血液标本,认清各种类型的血培养瓶标准需气瓶和厌气瓶FAN 需氧/厌氧中,15,血培养标本在接种前注意事项？,所有培养瓶必须检查有无变色或浑浊,按一人一瓶一带原则，严禁多个患者同时采样，以防张冠李戴,注意培养瓶的有效期，不能过期培养,用,75%,酒精消毒,瓶盖,，不能用碘酒,血培养标本在接种前注意事项？所有培养瓶必须检查有无变色或浑浊,16,采集最佳方案,采集最佳方案,17,“,How many blood culture sets do I need to draw?”,应该采几份血液标本,?,“How many blood culture sets d,18,采血份数,NUMBER OF SETS,Weinstein MP,Reller LB,Murphy JR,and Lichtenstein KA Rev Inf Dis 5:35,1983,采血份数 NUMBER OF SETSWeinstein,19,Cockerill,CID 2004,Cockerill,CID 2004,20,表皮葡萄球菌的临床意义分析,样本数,阳性标本,有意义,%,污染率,%,不明,%,1,1,0,97,3,2,1,2,95,3,2,2,60,3,37,3,1,0,100,0,3,2,75,0,25,3,3,100,0,0,表皮葡萄球菌的临床意义分析样本数阳性标本有意义%污染率%不明,21,需要抽取多少份血培养样本？,答案,:,每位患者采血最少,2,份，每份包含需氧跟厌氧（小儿除外）,注意：一次穿刺采血，算“一份”。,需要抽取多少份血培养样本？答案:,22,标本须间隔多久采集,?,答案：,1.,每份标本应在,5,分钟内采集完成,因为体内巨细胞吞噬系统会在,15 30,分钟内清除掉进入人体内的细菌,.,2.,怀疑,亚急性心内膜炎患者每间隔一个小时采集一份,共采集,3,份标本,.,标本须间隔多久采集?答案：,23,我们应该采集多少血液呢,?,我们应该采集多少血液呢?,24,采血量与检出率的关系,Overall/,Mayo,采血量与检出率的关系Overall/Mayo,25,答案,:,1,、采血量是影响灵敏度最关键因素。,2,、一份标本,2,个瓶子,最少要,10ml,最好采,20ml,分别注入,2,个瓶内。,2,份,4,个瓶子,最少,20ml,，最好,40ml,。,3,、婴幼儿,1-2ml,，儿童,3-5ml,。,答案:,26,如何区分污染？,感染？,血培养的规范化操作-课件,27,体表定植的正常微生物群与临床检出的主要致病菌,体表定植的正常微生物群,临床检出主要致病菌,表皮葡萄球菌,座疮丙酸杆菌,棒状杆菌属,康状鳞斑霉,金黄色葡萄球菌,链球菌属,消化球菌属,分支杆菌属,芽孢杆菌属,不动杆菌属,肠杆菌科,假单胞菌,念珠菌属,革兰阴性菌,大肠埃希菌,克雷伯菌属,不动杆菌属,肠杆菌属,嗜麦芽窄食单胞菌,变形杆菌属,流感嗜血杆菌,革兰阳性菌,金黄色葡萄球菌,凝固酶阴性葡萄球菌,肺炎链球菌,溶血性链球菌,1.,翁心华等,.,现代感染病学,.,上海医科大学出版社,.1998,年第一版：,23-29,2.,汪复等,.,中国感染与化疗杂志,.2010;10(5):325-334.,大多数临床检出的主要致病菌同时也是人体体表定植的正常菌群，因此，临床报告的细菌检出可能包含了人体定植的细菌！,体表定植的正常微生物群与临床检出的主要致病菌体表定植的正常,28,检测非培养的感染性指标,WBC,计数,各种病原体的抗原或抗体检测,CRP,定量,内毒素定量,降钙素原（,PCT,）,其他,检测非培养的感染性指标WBC计数,29,血培养的采集程序,皮肤消毒,培养瓶消毒,静脉穿刺和接种,血培养的采集程序 皮肤消毒,30,培养瓶消毒,75%,酒精擦拭血培养瓶橡皮塞，,作用,60s;,用无菌纱布或无菌棉,签清除橡皮塞子表面残余酒精；,注意不能用碘酒消毒。,培养瓶消毒 75%酒精擦拭血培养瓶橡皮塞，,31,皮肤消毒,75%,酒精擦拭静脉穿刺部位待,30s,以上,;1%-2%,碘酊作用,30s,或,10%,碘伏作用,90s,以上，从穿刺点,向外画圈,消毒,区域,直径,3cm,以上。,75%,酒精脱碘。,对碘过敏的患者,用,75%,酒精消毒,60s,，待酒精挥发后采血,对酒精过敏者可用,1%,新洁尔灭消毒。,皮肤消毒75%酒精擦拭静脉穿刺部位待30s以上,32,静脉穿刺和培养瓶接种,在穿刺前或穿刺,期间为防止静脉,滑动，可戴乳胶,手套固定静脉；用注射器无菌穿刺取血后，,直接注入血培养瓶（,勿换针头,、先注入厌氧血瓶后,注入需氧血瓶）,;,血培养标本接种到血培养瓶后轻轻,颠倒混匀以防血液凝固，立即送检。,静脉穿刺和培养瓶接种 在穿刺前或穿刺,33,三、血培养样本的运送,注入标本后的血培养瓶应立即送检。常规运送时间,2,小时。,若天气寒冷应注意保暖。,三、血培养样本的运送注入标本后的血培养瓶应立即送检。常规运送,34,血液标本采集后不能立即送检怎么办？,血液标本采集后的血培养瓶如果不能及时送检，需室温保存或置,35-37,孵箱中，,切勿冷藏！,因为有些苛养菌如肺炎双球菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等遇冷很容易死亡。,血液标本采集后不能立即送检怎么办？血液标本采集后的血培养瓶如,35,四、加强与临床的沟通,血培养的规范化操作-课件,36,1,、临床抗感染治疗与实验室结果不符可能原因,检测到的微生物为非病原菌,细菌存在有隐性的耐药机制,非常规培养能检测的感染性病原体,临床的抱怨（常见）的解答,1、临床抗感染治疗与实验室结果不符可能原因检测到的微生物为非,37,临床问题（常见）的解答,2,、如何解答临床医师提出的问题？,能否给我加做一些抗菌物的药敏,检测？,能否分析一下分离到的细菌是污,染菌还是致病菌？,临床问题（常见）的解答2、如何解答临床医师提出的问题？,38,1,、,能否给我加做一些抗菌药物的药敏检测？,如何回答？,视所要加的抗菌药物来定,加的理由，不加的理由说明,A,、是否有,CLSI,的解释标准,B,、是否已有了指导性菌物在报告中,C,、是否有标准的药物纸片,.,1、能否给我加做一些抗菌药物的药敏检测？如何回答？,39,2,、,能否分析一下分离到的细菌是污染菌还是致病菌？,分析分离菌株的来源,分析病人的状况：,检测非培养的感染性指标,记住任何所谓的正常寄驻菌都有可能成为 病原菌！,2、能否分析一下分离到的细菌是污染菌还是致病菌？分析分离菌株,40,如何突现血培养的临床价值？,三级报告,一级报告：,阳性结果，立即口头报告，主要包括革兰,染色特性和形态,.,二级报告：,报告直接抗菌药物敏感试验结果和细菌种属的初步鉴定结果,.,三级报告,最终结果（书面）报告,阳性培养结果（最终鉴定结果、最终药敏结果）,培养,5,日报告无菌生长,如何突现血培养的临床价值？三级报告,41,培养结果（,48h,阳性）：表皮葡萄球菌,患者：,男，,15,岁,临床诊断：,肺炎（,T38.5,）,标本：,左侧静脉血液（单瓶）,抗菌药物名称,（,直径,mm,）,结果,抗菌药物名称,（,直径,mm,）,结果,-,内酰胺酶,POS,+,克林霉素,22,S,青霉素,G,6,R,四环素,24,S,苯唑西林,6,R,呋南妥因,32,S,头孢唑林,28,S,万古霉素,16,S,头孢噻肟,32,S,替考拉宁,20,S,环丙沙星,9,R,利奈唑胺,18,R,复方新诺明,26,S,庆大霉素,6,R,红霉素,6,R,趣味问题,2,1.,此检测结果可信吗？,2.,如果可信选用什么药物？如果不可信请说明理由！,培养结果（48h阳性）：表皮葡萄球菌患者：男，15岁,42,Thank You!,Thank You!,43,检验前样本的正确操作,正确的样本处理程序,提高微生物学的检验质量,检验前样本的正确操作正确的样本处理程序,44,细菌隐性的耐药机制及多元性,隐性耐药机制：,低水平表达的耐药基因存在等,耐药机制的多元性：,-,内酰胺类,可能同时有,ESBLs,、,AmpC,、碳青霉烯类酶；膜通透、外排泵及靶位改变,喹诺酮类与氨基糖苷类,膜通透、外排泵、靶位改变、钝化酶等,细菌隐性的耐药机制及多元性隐性耐药机制：,45,