第,2,节 微生物的培养技术及应用一 微生物的基本培养技术（第,1,课时）,第2节 微生物的培养技术及应用一 微生物的基本培养技术,向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，再经过发酵酒可以形成酸奶。由于制作工艺并不复杂，一些人会在家里自制酸奶。自制酸奶虽然方便，但是由于自制酸奶造成肠胃不适的事屡见不鲜，主要原因是在制作过程中有杂菌混入。那么怎样才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物呢？,从社会中来,向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，,19,世纪中期，法国酿酒业曾一度遭到毁灭性打击，生产的葡萄酒出现了变酸变味的怪事,法国科学家巴斯德发现，导致生产失败的根源在于发酵物中混入了,微生物,。,19世纪中期，法国酿酒业曾一度遭到毁灭性打击，生产的葡萄酒出,无细胞结构,原核细胞,真核细胞,微生物,真菌,:,酵母菌、毛霉等；,原生生物,:,草履虫、变形虫等,微生物类群,：难以用肉眼观察的微小生物的统称。,病毒,:,SARS,病毒、新冠病毒等,RAN,病毒；噬菌体等,DNA,病毒,细菌,:,蓝细菌、大肠杆菌、乳酸菌等；,放线菌：链霉菌等,无细胞结构原核细胞真核细胞微生物真菌:酵母菌、毛霉等；微生物,要为人们需要的微生物提供合适的营养和环境条件；,要确保其他微生物无法混入，并将需要的微生物分离出来。,1._,是研究和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。,防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物,2.,在实验室培养微生物的要求,:,要为人们需要的微生物提供合适的营养和环境条件；1._,固体培养基,液体培养基,有,无 凝固剂琼脂,一、培养基的配制,1,、培养基的概念：,人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的,营养基质,即培养基。,2,、,培养基的作用：,用以,培养、分离、鉴定、保存,微生物或,积累其代谢产物,。,固体培养基液体培养基有无,例,1,，加入青霉素的培养基：分离酵母菌、霉菌等真菌；,例,2,，不加氮源的无氮培养基：分离固氮菌；,例,3,，不加含碳有机物的无碳培养基：分离自养型微生物,例,1,，,加入伊红美蓝的培养基：鉴别大肠杆菌,例,2,，加入刚果红的培养基：鉴别纤维素分解菌,按功能划分，包括,_,。,a,选择培养基：将某种类微生物从混杂的微生物群体中分离出来。,b,鉴别培养基：用于鉴别不同类型的微生物,3,、培养基的类型：,按物理性质划分，包括,_,。,按组成成分划分，包括,_,。,一、培养基的配制,固体培养基和液体培养基,合成培养基、天然培养基、半合成培养基,选择培养基和鉴别培养基,例1，加入青霉素的培养基：分离酵母菌、霉菌等真菌；例1，加入,注意：有些含有,C,、,H,、,O,、,N,的化合物既可以作为碳源，,又可以作为氮源，如氨基酸等,自养微生物,异养微生物,4.,培养基的成分,基本成分,碳源,氮源,水,无机盐,无机碳源：,CO,2,、CO,3,2-,、HCO,3,-,有机碳源：,牛肉膏、蛋白胨等,无机氮源：,NH,4,、,NO,3,-,有机氮源：,牛肉膏、蛋白胨、尿素等,一、培养基的配制,注意：有些含有C、H、O、N的化合物既可以作为碳源，自养微生,4.,培养基的成分,组分,含量,提供的主要营养,牛肉膏,5g,碳源、磷酸盐和维生素等,蛋白胨,10g,氮源和维生素等,NaCl,5g,无机盐,H,2,O,定容至,1000mL,水,1000,mL,牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成,在主要营养物质的基础上，培养基还需要满足,微生物生长,的条件有：,对,pH,、特殊营养物质以及,O,2,的需求。,例如，培养乳酸杆菌需添加维生素；,培养霉菌需调至酸性；,培养细菌需调至中性或弱碱性；,培养厌氧微生物需提供无氧环境。,一、培养基的配制,4.培养基的成分组分含量提供的主要营养牛肉膏5g碳源、磷酸盐,9,例题,1.,下列有关微生物营养物质的叙述中，正确的是（）,A.,是碳源的物质不可能同时是氮源,B.,凡碳源都提供能量,C.,除水以外的无机物只提供无机盐,D.,无机氮源也能提供能量,D,例题1.下列有关微生物营养物质的叙述中，正确的是（,二、无菌技术,1.,获得纯净的微生物培养物的,关键是,_,。,2.,无菌的范围,实验操作的,空间、操作者的衣着和手,，进行,清洁和消毒,培养的,器皿、接种用具和培养基,等进行,灭菌,实验操作时应避免已经,灭菌处理的材料用具,与周围的物品相接触,注意：为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在,超净工作台,并在,酒精灯火焰,附近进行。,防止杂菌污染,二、无菌技术1.获得纯净的微生物培养物的关键是_,消毒：,是指使用较为,温和,的,物理、化学或生物,等方法杀死物体表面或内部,一部分,微生物。,灭菌：,是指使用,强烈,的,理化,方法杀死物体内外,所有的,微生物，包括芽孢和孢子。,二、无菌技术,3.,防止杂菌污染的方法,消毒：是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀,二、无菌技术,5.,常用的消毒方法,煮沸消毒：,100,煮沸,5-6 min,，可以杀死微生物的,营养细胞,和,一部分芽孢,。,巴氏消毒：,62-65,下煮,30 min,或,80-90,处理,30s-1min,，适合,不耐高温的液体,，如牛奶。可以杀死牛奶中的,绝大多数微生物,，并且不破坏牛奶的营养成分。,化学药剂消毒：,用,75%,酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒,；,氯气消毒水源,等。,紫外线消毒：,接种室、接种箱或超净工作台,可用紫外线照射,30min,。在照射前，适量喷洒,石碳酸,或,煤酚皂溶液,等消毒液，加强消毒效果。,二、无菌技术5.常用的消毒方法煮沸消毒：100煮沸5-6,学科网原创,二、无菌技术,6.,常用的灭菌方法,湿热灭菌：,利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌。高压蒸汽灭菌效果最好，,100 kPa,、,121,下维持,15-30 min,，常用于,培养基、无菌水,等的灭菌。,干热灭菌：,160-170,下加热,2-3h,。常用于,玻璃器皿和金属器具,（耐高温的和需要保持干燥的物品）。,灼烧灭菌：,常用于,涂布器、接种环、接种针、试管口或其它金属用具,等的灭菌。直接在酒精灯火焰的,充分燃烧层（外焰）,灼烧。,学科网原创二、无菌技术6.常用的灭菌方法湿热灭菌：利用沸水,类型,适用范围,操作方法,消,毒,灭,菌,较为,温和,理化方法，杀死,部分微生物,（,不,包括芽孢、孢子）,强烈,的理化方法，杀死,所有微生物,（包括,芽孢、孢子,）,煮沸消毒法,日常生活,100,煮沸,5,6 min,巴氏消毒法,不耐高温的液体,62,65,煮,30 min,或,80-90,煮,30s-1,min,化学药剂,生物活体、水源等,擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源,紫外线,紫外线照射,30 min,灼烧灭菌,接种的,金属工具,、接种时用的,试管口,或,瓶口,等,直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧,干热灭菌,耐高温、需要保持干燥的物品,如,玻璃器皿和金属用具,等,物品放入干热灭菌箱,160,170,加热,2,3h,湿热灭菌,培养基、培养皿,等,生产和实验室常用,高压蒸汽灭菌锅内,100 kPa,温度,121,15,30 min,消毒与灭菌,接种室、接种箱，超净工作台,类型适用范围操作方法消灭较为温和理化方法，杀死部分微生物（不,15,某同学将,5,个手指尖在贴有“洗手前”标签的培养基上轻轻按一下；然后用肥皂将该手洗干净，再将,5,个指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基上轻轻按一下；将这两个培养皿放入,37,恒温培养箱中培养,24h,后，发现贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落较少。请分析回答下列问题,。,应用探究,（,1,）这个材料中哪些材料用具需要灭菌处理？,（,2,）从实验结果来看，洗手后我们就能进行无菌操作了吗？操作时，我们可以采用什么方法来避免手上的微生物的污染？,培养皿、培养基,不能,用,75%,酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒；实验操作应在超净工作台并在酒精灯火焰附近进行,某同学将5个手指尖在贴有“洗手前”标签的培养基上轻轻,培养基的类型,培养基的营养物质,消毒,灭菌,微生物的实验室培养,课堂小结,培养基,无菌技术,按物理性质划分,按组成成分划分,按功能划分,基本成分：,碳源、氮源、水、无机盐,特殊需求：,维生素（如乳酸杆菌）、碱基,等,煮沸消毒,巴氏消毒,紫外线消毒,化学药剂消毒,湿热灭菌,干热灭菌,灼烧灭菌,培养基的类型培养基的营养物质消毒灭菌微生物的实验室培养课堂小,第,2,节 微生物的培养技术及应用一 微生物的基本培养技术（第,2,课时）,第2节 微生物的培养技术及应用一 微生物的基本培养技术,传统发酵通常直接利用原材料中天然酵母菌,工业生产通常使用人工选育的高活性酿酒酵母,如何获得纯种酵母菌？,传统发酵通常直接利用原材料中天然酵母菌工业生产通常使用人工选,三、微生物的纯培养,培养物：在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体成为培养物；,纯培养物、纯培养：,由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为,纯培养物,，获得纯培养物的过程就是,纯培养,。,1.,培养物、纯培养物、纯培养：,2.,纯培养的步骤包括：,配制培养基、灭菌、,接种、分离和培养,三、微生物的纯培养培养物：在微生物学中，将接种于培养基内，,20,酵母菌的纯培养,探究,-,实践,1.,概念：,分散的微生物在适宜的,固体,培养基表面或内部可以繁殖形成,肉眼可见,的、有一定形态结构的,子细胞群体,，这就是,菌落,。,2.,特征：,3.,功能：,4.,获得单菌落的方法：,三、微生物的纯培养,鉴定菌种的重要依据,大小、形状、隆起程度、颜色等。,平板划线法、,稀释涂布平板法,菌落,酵母菌的纯培养探究-实践 三、微生物的纯培养鉴定菌种的重要依,21,方法步骤,配制培养基,称取去皮,马铃薯,200g,，切成小块，加水,1000ml,，加热煮沸至马铃薯软烂，用,纱布过滤,。向滤液中加入,20g,葡萄糖,、,15-20g,琼脂,，用,蒸馏水,定容至,1000ml,。,灭菌,将配制好的,培养基,转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入,高压蒸汽灭菌锅,中，在压力为,100kPa,、温度为,121,的条件下，灭菌,15-30min,。将,5-8,套,培养皿,包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入,干热灭菌箱,内，在,160-170,灭菌,2h,。,倒平板,酵母菌的纯培养,待培养基冷却到,50,左右时，在,酒精灯火焰附近,倒平板,。,1.,制备培养基,培养基：用高压蒸汽灭菌锅,湿热灭菌,培养皿：在干热灭菌箱内,干热灭菌,方法步骤配制培养基称取去皮马铃薯200g，切成小块，加水,22,1,2,3,4,酵母菌的纯培养,1.,拔出锥形瓶的棉塞,2.,将瓶口迅速通过火焰,3.,用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（,10-20mL,）倒入培养皿，立即盖上皿盖,4.,等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒转过来放置,倒平板的具体步骤,1.,制备培养基,1234酵母菌的纯培养1.拔出锥形瓶的棉塞2.将瓶口迅速通过,思考,1,：培养基灭菌后，需要冷却到,50,左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？,可以,用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。,思考,2,：在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？,最好,不要用这个平板培养微生物。,防止,空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。,将,所倒平板放入,37,的恒温箱中培养,12h,24h,，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。,思考,4.,怎么确定所倒平板未被杂菌污染？,思考,3,：平板冷凝后，为什么要将平板倒置？,既可以防止培养基表面的水分挥发；,又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。,思考1：培养基灭菌后，需要冷却到50左右时，才能用来倒平板,24,1.,灼烧接种环，直至接种环金属丝烧红,2.,在火焰旁冷却接种环，拔出酵母菌培养液试管的棉塞,3.,试管口