单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,肝纤维化检测及肝纤四项产品的应用,肝纤维化检测及肝纤四项产品的应用,Contents,化学发光技术简介,肝纤维化综述,肝纤维化的检测方法,血清学肝纤维化四项诊断的应用价值,其他血清学检测指标简介,肝纤维化诊断现状,肝纤四项检测常见问题,Contents化学发光技术简介,化学发光技术简介,Part1.,化学发光免疫分析技术概念,化学发光免疫诊断技术是临床诊断领域最有前景的技术之一。其利用鲁米诺在酶促下发出的光子信号,(,以及其他发光方式,),，放大抗原抗体反应，对体内的各种微量标志物进行检测，从而对各种疾病进行早期、特异和定量化的诊断。,其特点在于灵敏度高、测定范围宽、快速、简便，并且在测试中不使用有害的试剂，无污染。,化学发光技术简介Part1.化学发光免疫分析技术概念,化学发光技术简介,Part2.,化学发光免疫分析技术的领先性,放射免疫诊断技术（,RIA,）,酶联免疫诊断技术（,ELISA,）,化学发光免疫诊断技术（,CLIA,）,20,世纪,60,年代,70,年代,80,年代,90,年代,2000,年,2020,年 时间,临床免疫诊断技术的发展基本历经了以下三个阶段：,化学发光技术简介Part2.化学发光免疫分析技术的领先性放射,化学发光技术简介,化学发光技术简介,化学发光技术简介,Part3.,化学发光免疫分析技术的优势,1,）,灵敏度高,灵敏度可达,10-19mol/L,以上。,灵敏度,(mol/L),10,-22,10,-18,10,-14,10,-10,酶标,荧光,放免,发光,化学发光技术简介Part3.化学发光免疫分析技术的优势1）,化学发光技术简介,2,）,线性范围宽,发光强度与测定物质浓度间的线性关系达,0,105,范围。与酶标免疫的比色吸光度（,OD,值）,0,3.0,的范围相比，优势明显。例：,CEA,酶免只能达到,80ng/ml,；发光可以达到,3000ng/ml,。,线性范围,10,5,10,4,10,3,10,2,酶标,荧光,放免,发光,化学发光技术简介 2）线性范围宽线性范围105酶标荧光放免发,化学发光技术简介,酶标,荧光,放免,发光,有效期（月）,18,15,12,9,6,3,0,3,）,试剂有效期长,发光免疫的试剂有效期可长达,1,年。放射免疫由于放射性同位素衰变，一般有效期只有一个月，酶标免疫的底物稳定性差，有效期有限。,化学发光技术简介酶标荧光放免发光有效期（月）183）试剂有效,化学发光技术简介,4,）,安全性好：,消除了放射性污染，环保、安全。到目前为止，还未发现化学发光免疫法的危害性。,化学发光技术简介 4）安全性好：,化学发光技术简介,化学发光,（,CLIA,）,酶免,（,EIA,）,放免,（,RIA,）,检测限（,M/L,）,10,-17,-10,-19,10,-12,10,-15,标记物,酶蛋白,发光物质,酶蛋白,放射性元素,灵敏度,高,低,高,线性范围,宽,窄,宽,放射污染,无,无,有,试剂稳定性,6-12,个月,6-12,个月,1-3,个月,操作,易,易,繁琐,Part4.,免疫分析技术对比（本章小结）,化学发光技术简介化学发光酶免放免检测限（M/L）10-17,肝纤维化（,hepatic fibrosis,）是指肝细胞发生坏死及炎症刺激时，肝脏内纤维结缔组织异常增生的病理过程。,是慢性肝病的共同病理学基础，随着各种不同的慢性肝脏疾病的进展可逐渐形成肝纤维化。,轻,肝纤维化重,肝硬化,（不同之处,肝小叶结构是否完整）,引起肝纤维化的病因消除后,早期肝纤维化可完全恢复，肝硬化则不易复原。,肝纤维化综述,Part1.,肝纤维化的概念,肝纤维化（hepatic fibrosis）,肝纤维化严重时可引起门脉高压,纤维化组织压迫门静脉分支，门静脉阻力升高。,从生理角度看，肝损伤时肝内纤维结缔组织增生是一种对损伤的正常修复反应。,肝小叶结构紊乱，肝细胞数量,过度增生,减少，肝功能降低,肝脏萎缩变硬，肝硬化失代偿,肝纤维化是慢性肝病最重要的病理特征，也是慢性肝炎、肝硬化进一步发展、恶化的重要原因。,肝纤维化综述,Part2.,肝纤维化的病理生理学,肝纤维化严重时可引起门脉高压纤维化组织压,肝纤维化综述,肝纤维化综述,慢性乙型肝炎,慢性丙型肝炎,脂肪性肝炎（酒精或非酒精性）,药物,免疫性肝病,胆汁淤积等,肝纤维化综述,Part3.,肝纤维化的病因学,慢性乙型肝炎肝纤维化综述Part3.肝纤维化的病因学,过度纤维化会导致肝脏萎缩变硬，直到引起肝硬化或肝衰竭，进而导致患者完全丧失生活能力和死亡。,据统计，目前我国乙肝病毒携带者,1.2,亿，慢性乙肝患者约,3500,万，加上慢性丙肝、脂肪肝、血吸虫病、免疫性肝病等，构成了庞大的潜在的肝纤维化患者群。,调查显示，肝硬化占据国际上疾病死亡病因的第六位。,早期发现并积极治疗肝纤维化，使之逆转或延缓其发展，对提高患者生活质量，改善患者预后，有十分重要的作用。,肝纤维化综述,Part4.,肝纤维化的流行病学,过度纤维化会导致肝脏萎缩变硬，直到引起肝硬化或肝衰竭，进而导,肝纤维化是肝硬化发展的必经阶段，各种因素导致的肝损伤，都可继发肝纤维化形成进而发展为肝硬化。,早期肝纤维化可完全恢复，肝硬化则不易复原。,肝纤维化综述,Part5.,小结,肝纤维化是肝硬化发展的必经阶段，各种因素导致的肝损,肝活检,病理学检查仍是诊断肝纤维化的,金标准,，是明确诊断、衡量炎症活动度、纤维化程度以及判定药物疗效的重要依据。目前一般采用半定量计分系统。但是，由于肝纤维化在肝内分布不均匀，而且肝穿刺组织仅占全肝的五万分之一，可造成诊断误差。因此强调肝活检标本至少,15 mm,，并包含,6,个以上汇管区。,Part1.,病理学检查,肝纤维化的检测方法,肝活检病理学检查仍是诊断肝纤维化的金标准，是,肝纤维化的检测方法,肝纤维化的检测方法,现代影像学手段如,B,型超声、,CT,、磁共振成像（,MRI,）,等可以发现肝纤维化的某些征象，如肝脏轮廓、大小、及肝实质信号强弱的改变，肝脏血管内径及血流方向、速度的改变，脾脏大小的改变等。彩色多普勒超声检查或放射性核素扫描可以测定肝脏动脉和门脉的血流量及功能性门体分流情况。但是，目前这些影像学检查尚,不能对纤维化做出确诊和鉴别诊断，更难于准确判断肝纤维化的严重程度,，故只能作为一种辅助诊断。,Part2.,影像学检查,肝纤维化的检测方法,现代影像学手段如B型超声、CT、磁共振成像（M,细胞外基质,(ECM),及代谢产物,ECM,代谢相关酶类及抑制剂,胶原蛋白 例如：,PNP PIP Col Col VI,非胶原糖蛋白 例如：,LN FN FNR UN TN,糖胺多糖 例如：,HA,蛋白多糖,胶原酶及其抑制剂 例如：,MMPs TIMPs,脯氨酰羟化酶（,PH,）,赖氨酰氧化酶,细胞因子,多肽类生长因子 例如：,TGF-,白细胞介素 例如：,IL-1,肿瘤坏死因子 例如：,TNF-,干扰素 例如：,IFN-,Part3.,血清学检查,肝纤维化的检测方法,细胞外基质(ECM)及代谢产物ECM代谢相关酶类及抑制剂胶原,Part4.,不同方法的对比,肝纤维化的检测方法,Part4.不同方法的对比肝纤维化的检测方法,透明质酸（,hyaluronic acid,，,HA,）主要由纤维母细胞细胞合成，通过淋巴系统进入血循环，并由肝脏快速清除。肝内皮细胞是,HA,摄取、降解的场所。由于体内存在有效的,HA,清除机制，正常人血清中仅有低水平的,HA,。多种原因导致的肝病可使血清,HA,水平上升，主要与肝脏清除功能下降、肝脏内成纤维细胞（肝星状细胞）合成增加有关。在肝纤维化时，肝星状细胞合成,HA,水平大大升高，且内皮细胞清除,HA,能力亦有下降，双重原因导致肝纤维化中,HA,水平上升。,血清学肝纤维化四项诊断的应用价值,Part1.,透明质酸,透明质酸（hyaluronic acid，HA）,HA,又称“小肝穿”，测定具有以下作用：,1.,反映肝脏纤维化形成；,2.,反映肝脏纤维化程度；,3.,反映肝细胞功能；,4.,反映肝脏炎症性病变；,5.,无论是无症状性病毒感染或严重病毒感染、酒精性肝病、胆汁性肝硬化，,HA,均是有效指标，可用于药物疗效观察及病情的动态观察。,就目前临床研究而言：,HA,是目前众多纤维化生化指标中最为敏感和特异的指标（,80%,以上）,。在慢性肝病肝纤维化组织学,-,血清对照研究中发现，,HA,是,4,项细胞外间质成分中最为敏感和特异的指标，,HA,的诊断准确性为,82.9%,，特异性为,93%,，敏感性为,56%,。,血清学肝纤维化四项诊断的应用价值,HA又称“小肝穿”，测定具有以下作用：1.反映,血清学肝纤维化四项诊断的应用价值,Part2.,层粘连蛋白,层粘蛋白（,laminin,，,LN,）是基底膜成分中的主要大分子糖蛋白，在肝脏内与,型胶原共同分布，大量沉积则引起肝窦毛细血管化，直接影响肝窦血流阻力。,LN,有十几个亚型，有报道显示肝纤维化过程中肝脏内大量合成,1,和,1,链，有人研究老鼠肝纤维化时说大量合成的是,2,型而非,1,型。但到目前，在肝纤维化过程中研究最多的是,1,型。,血清,LN,的测定通常是测定其,LN-P1,片断。,LN-P1,主要反映的是肝纤维化形成中的纤维化活性，其血清值被认为是反映基底膜更新率的指标，可提示肝窦的毛细血管化和汇管区纤维化。,血清学肝纤维化四项诊断的应用价值Part2.层粘连蛋白,LN,在肝纤维化中的诊断价值：,与肝纤维化形成的病因密切相关，,LN,水平在酒精性肝硬化明显高于病毒性肝硬化和胆汁性肝硬化，,LN,水平可反映酒精性肝病是否存在门脉高压及门脉高压程度，但在非酒精性肝硬化，,LN,则不能用于门脉高压的诊断。,目前，有关,LN,对诊断肝纤维化的价值仍有争议，其诊断敏感性不及,Col,和,PNP,。,血清学肝纤维化四项诊断的应用价值,LN在肝纤维化中的诊断价值：与肝纤维,血清学肝纤维化四项诊断的应用价值,PNP,是,PC,在细胞外形成原胶原前，被相关酶切下后进入血循环的氨基端尾肽。完整的,PNP,主要通过窦状隙内皮细胞受体介导的内吞作用被清除，故,胶原代谢活跃及肝功能损伤时，血清,PNP,升高，,PNP,被视为肝纤维化生成的血清学指标。,Part3.,型前胶原,N,端肽,血清学肝纤维化四项诊断的应用价值 PNP是PC,血清学肝纤维化四项诊断的应用价值,PNP,的含量可以有效地区别轻型与中,/,重型慢性肝炎,，提示活动性肝纤维化，是反映慢性肝纤维化活动性和程度的指标。,长期随访血清,PNP,含量能判定慢性肝病的预后,。对原发性胆汁性肝硬化、慢性迁延性肝炎、慢性活动性肝炎、自身免疫性肝炎进行,210,年随访，无论药物治疗与否，原发性肝硬化者血清,PNP,总是升高，接受肝移植后恢复正常；慢性迁延性肝炎,PNP,含量在正常上限；发展成肝硬化的慢性活动性肝炎其血清,PNP,持续升高，转入缓解期则血清,PNP,正常。唯自身免疫性肝炎例外，血清值一直不升高。,血清学肝纤维化四项诊断的应用价值 PNP的含量,血清,PNP,可评估慢性肝病，特别是慢性活动性肝炎纤维化过程，其临床,判断预后价值已被公认,，但总体敏感性、特异性不高。有报道，血清,PNP,含量判别肝纤维化的敏感性和特异性分别是,76%,和,71%,。但,PNP,正常或轻微升高不能排除已经存在但正在缓慢进展中的纤维化。,此外，值得提出的是，在年幼的儿童，生长导致全身间质胶原的更新可使血清,PNP,水平明显升高，故,对儿童肝纤维化没有诊断价值,。,血清学肝纤维化四项诊断的应用价值,血清PNP可评估慢性肝病，特别是慢性活动性肝,血清学肝纤维化四项诊断的应用价值,型胶原