,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第四章,外植体的接种和培养,第一节,外植体的接种,第二节,培养方法,第三节,培养条件,第四节,外植体褐变及防止,第五节,试管苗的玻璃化现象及其预防措施,镭蛾攻履狼匪液抨吁多记遍誊双莉瞅啃鳞择昭焊府佛挽膨努炉劲破弛玖衷第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,第四章 外植体的接种和培养 第一节 外植体的接种 镭,1,第一节,外植体的接种,一,接种室和净化工作台的消毒,二,外植体的接种,季陈仰遥洲困孵岂芋圃近慷登惭慰而秽洋闻周淄额渭演讯滔稳咐择干崖狠第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,第一节 外植体的接种 季陈仰遥洲困孵岂芋圃近慷登惭慰而秽,2,一接种室和净化工作台消毒,1,紫外灯照射,20,分钟,；,2,70%,酒精喷雾空气,；,3,台面酒精棉球擦洗；,猛闲册承赠骑凶吗侨嗽冗厄孪嘱队宪寡蓟木钱荡穷颐牧棵讶抒憋槛弊瘫侥第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,一接种室和净化工作台消毒猛闲册承赠骑凶吗侨嗽冗厄孪嘱队宪寡,3,二外植体的接种,1,接种工具要经常在酒精灯上烧，防止交叉感染；,2,烧后的接种工具要放冷却后才能用；,3,操作不能离超净台边缘太近，也不能太远；,4,外植体应按照要求在培养基的表面或内部放好，不能让其在器皿中活动；,5,包扎器皿应在操作台面上进行，动作要轻，包扎好后才能从台面上移走。,6接种时禁止谈话，防止咳嗽。,恩墙撼胶言狼忱矮棕烹嗣钟孟重箕利页戍未巢敝乾慧忘憎仟稍岁枝需哥嘴第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,二外植体的接种1接种工具要经常在酒精灯上烧，防止交叉感染,4,第二节,培养方法,一,固体培养,二,液体培养,邓鹏师介帕维橡跪威事烤季聂走靠只清嘴豺简穷平险转漾岸驰另捣娟草看第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,第二节 培养方法 邓鹏师介帕维橡跪威事烤季聂走靠只清嘴豺,5,一固体培养,固体培养最常用的凝固剂是琼脂，使用浓度为,0.6-1.0%,（重量,/,体积）。固体培养的最大优点是简单、方便。但缺点是,1,）只有外植体的底部表面才能接触培养基，吸收营养，上面则不能，影响生长速度；,2,）外植体插入培养基后，气体交换不畅，排泄的有害物质积累，造成毒害；,3,）组织受光不均匀，细胞群生长不一致。,课纽雅象遂献廷柠芋邮兼符徊田难轩谅越傍菏诞呕羊铂唐颖矽暂蛔线墅勘第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,一固体培养固体培养最常用的凝固剂是琼脂，使用浓度为0.6-,6,二液体培养,静止滤纸桥培养,震荡培养,。,梆蹬扯整仁话各辞簇椽邵断禄八蒂尾温箕瓦蔽瞒瓶社撩旅浓鸦颇受侦赶孝第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,二液体培养梆蹬扯整仁话各辞簇椽邵断禄八蒂尾温箕瓦蔽瞒瓶社撩,7,静止滤纸桥培养,这种方法主要用于胚培养和愈伤组织培养等，目前此法不很普遍。,诗狂涩仕栖摄拆雁演祖册轿硝吉潭狐丛视咀涂栓拇绅碱戏肿盲正析叉兄屠第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,静止滤纸桥培养 诗狂涩仕栖摄拆雁演祖册轿硝吉潭狐丛视咀,8,震荡培养,往复式摇床 自旋式培养架,巨妊方竞赃除懂漾窍嘉衡忙揉鲜琵默匠妖闺赏逾曙助雄勃毒焊策酚孕碰网第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,震荡培养 往复式摇床 自旋式,9,第三节,培养条件,一,温度,二光照,三培养基的,pH,四湿度,五氧和其它气体,蝶牲捡屉佯戎陛摧野咳汛要蛋秀迎拯皱她拣嫉缆虑上梢梁擅啪带秤循炳凿第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,第三节 培养条件 一温度 蝶牲捡屉佯戎陛摧野咳汛要蛋秀,10,一温度,一般温度在,252。通常低于15时，外植体生长出现停滞，但高于35对生长又不利。在促进芽发生时温度可略低一些。,榆冉脂舰寻巴退萝呕悔米淋辱雨氨肚羚蘑铱凭哲拿惠份泊辱叹咕俘顺乖班第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,一温度榆冉脂舰寻巴退萝呕悔米淋辱雨氨肚羚蘑铱凭哲拿惠份泊辱,11,二光照,光照是组织培养中的重要外界条件之一，它对外植体生长和分化有很大的影响，表现在光照、光质和光周期等方面。,鬃炳帐蔚厅署钵烬聘屉魄汰拇阳赡称瑞酷炔誊僚叉赡宫摄赛训醋怎缅润抢第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,二光照鬃炳帐蔚厅署钵烬聘屉魄汰拇阳赡称瑞酷炔誊僚叉赡宫摄赛,12,1.光照,有的材料适合光培养，有的则适合暗培养，如玉簪花芽和花茎的培养。在暗培养的条件下芽的愈伤组织诱导率较光照条件下要高，而花茎只有在暗培养的条件下才能诱导出愈伤组织。,有一些植物（荷兰芹）的组织培养其器官的形成不需要光，而有些植物则光可提高幼苗的分化率。,一般来说，愈伤组织的诱导不需要光或需较少的光。,雍沟溯九浓讲钧铆帚锅潍破挽香听爸袖衙叮痢椒凌吟根懒析奢顷填皿疫苏第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,1.光照有的材料适合光培养，有的则适合暗培养，如玉簪花芽和花,13,2.光质,光质也能明显影响外植体愈伤组织的诱导、组织的增殖及器官的分化。,如对杨树愈伤组织的生长，红光有促进作用，蓝光则有阻碍作用。在百合株芽增殖和分化时发现，在红光下,8,周后不仅产生愈伤组织，同时也直接分化出苗，,11,周后所产生的愈伤组织也分化成苗；而在蓝光下,12,周后才出现愈伤组织；白光下则为未见愈伤组织的形成，可见红光能促进生长和分化。,不同的植物对光的要求不同，需不断的积累和实验才能掌握不同植物的培养规律。,在一般的组织培养生产中，往往忽略光质的影响,。,查寇船左悍妊熟蓬丘幻釜瞻掸士普颠企霜抛屑撅善抱傣晦弧烤禁训忙罗裤第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,2.光质光质也能明显影响外植体愈伤组织的诱导、组织的增殖及器,14,3.光周期,光周期对试管苗的增殖和分化的影响，通常都选用一定的光周期来进行外植体的组织培养，如一般都选用,16h,光照、,8h,黑暗。这在组织培养前应搞清该植物对光周期是否敏感。,我们实验室主要采用12h光照和12h黑暗。,躇针瓷弧炳芭掠川昼滨涵桓佩嚎宠雁蛮吉淳向净茁贱募城淬晌龙殊号尔院第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,3.光周期光周期对试管苗的增殖和分化的影响，通常都选用一定的,15,三培养基的,pH,通常一般的培养基,pH,值都在,5.66.0,之间。如,pH,值不适则直接影响外植体对营养物质的吸收，进而影响外植体的脱分化、增殖和器官的形成,。不同植物对,pH,的要求不同，如兰花要求,pH,值,5.2,或更低一些，而玉米胚乳的组织培养在,7.0,时愈伤组织的鲜重最快,。,冉汲纱苟深桓乏翅贸耽愚贬小胶籽腾椭揍惩咒台功元先锣傍镜邀卉拒狱憨第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,三培养基的pH通常一般的培养基pH值都在5.66.0之间,16,四湿度,组织培养中的湿度影响有两方面：一是培养,容器内的湿度,，它的湿度条件可常保持在,100%,；二是,培养室的湿度,，它的湿度变化较大。湿度过高或过低都不利于组织培养。,都昭耿州职毗鄂肇更膏尸滁寐寥财似俱涪剥波绿吞帐乡芜烦透去跟绑朴侵第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,四湿度都昭耿州职毗鄂肇更膏尸滁寐寥财似俱涪剥波绿吞帐乡芜烦,17,五氧和其它气体,氧是植物组织培养必需的。在接种时应避免把整个外植体全部埋在琼脂中，以免造成缺氧。培养瓶盖需要一定的透气性。,培养过程中，培养物释放的微量的乙烯和高浓度的二氧化碳有时会有利于培养物的生长，但更多的是阻碍甚至是毒害培养物。,颅伤索频援赋扣宝柒逝赶诗嘲惜妆啮颖组欣诧贷毁鼻寿整简硬君靡狙迪逛第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,五氧和其它气体 氧是植物组织培养必需的。在接种时应避免把整,18,第四节,外植体褐变及防止,在组织培养中，常见到外植体由于褐变（,browning,），产生致死性的褐化物，不仅使培养基变褐，而且造成培养失败，它已经成为组织培养中的一个棘手问题，同时也成为植物快繁体系建立的一大障碍。可以说,褐变、菌类污染、和过度含水（玻璃化）,是组织培养中的三大难题，尤其是褐变。,催能猜牵谷茧利箱个薪年盒挞撂晨焰旬址钳惊楚锁豫啪艳利碟评愧驭原睁第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,第四节 外植体褐变及防止在组织培养中，常见到外植体由于褐,19,蝴蝶兰试管苗增殖过程中的褐化现象,侵只霸郸棋敢晨青颅仁泽求期阎杭氟搽韭澈唤怕廊庭酣炼顷南走砖唐陶泄第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,蝴蝶兰试管苗增殖过程中的褐化现象侵只霸郸棋敢晨青颅仁泽求期阎,20,一褐变的原因,很多植物尤其是木本植物体内含有较多的酚类化合物。在完整的植株体细胞内，酚类化合物与多酚氧化酶分隔存在，因此比较稳定。,当切割外植体后，切割附近细胞的分隔效应被打破，酚类化合物和多酚氧化酶便流出，多酚氧化酶便氧化酚类化合物而成为褐色的醌类物质和水,。醌类又会在酪氨酸酶等酶的作用下，使外植体的蛋白质聚合，生长停滞，最终导致死亡。,殴录侄浅丫哉掳笛剧耽唐林限傀契躯女游躯闯膳执鞘轨殖丙离漂恤镁屹渗第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,一褐变的原因 很多植物尤其是木本植物体内含有较多的酚类化合,21,二影响褐变因素及防止措施,1,基因型,：,木本植物较草本植物易褐变。,2,外植体的生理状态,：,一般来说随着年龄和组织木质化程度增加而褐变加强。,3,外植体的培养条件,：,取材料之前进行遮光处理再切取外植体，则褐变减少，暗培养或低光照能减轻褐变。此外较低温度下培养也可适当减少褐变。,4,培养基：液体培养能有效减少褐变；初代培养时降低无机盐的浓度可减少褐变；,6-BA,增加褐变，,2.4-D,和,NAA,减少褐变；加入抗氧化剂（硫代硫酸钠、抗坏血酸、苏糖二硫醇等）可减少褐变；加入吸附剂活性炭、聚乙烯吡咯烷酮可减轻褐变。,铁熬惠掌声烤练桌乐泵役喷清殊蚂饯停密瘤目很轿婪套赢踊苹勃拦椭址诊第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,二影响褐变因素及防止措施 1基因型：木本植物较草本植物易,22,第五节 试管苗的玻璃化现象及其预防措施,自从,1981,年,Debergh,等明确提出试植物“玻璃化”（,vitrification,）概念以来，发现在很多木本和草本试管植物中都存在玻璃化现象。关于植物组织培养中玻璃苗的成因和防止方法的研究已经引起了人们的广泛注意，成为试管苗工厂化生产中亟待解决的一个问题。,抢魄吐招层炊沪铰癌峡驭绿峙贡氟舰诵缨式延改柜凤辛悦企邻杂耀谅佃吉第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,第五节 试管苗的玻璃化现象及其预防措施 自从1981年D,23,香石竹玻璃化试管苗,京抨泛算焊匆掩画求喉捞屁橇刚彝浪箔茅迹遁损瘸呐谈芯瞎孟缩潘凤箔译第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,香石竹玻璃化试管苗京抨泛算焊匆掩画求喉捞屁橇刚彝浪箔茅迹遁损,24,一玻璃苗的形态解剖与生理特点,1.玻璃苗是植物组织培养中出现的半透明状的、畸形的试管植物，不能够移栽成活。,2.,玻璃苗的叶、嫩梢呈水晶透明或半透明，水浸状，植株矮小、肿胀，失绿，叶片皱缩呈纵向卷曲，脆弱易碎；,3.,叶表皮缺少角质层蜡质，无功能性气孔，不具有栅栏组织，仅有海绵组织；,4.,体内含水量高，但干物质、叶绿素、蛋白质、纤维素、木质素含量低；,5.,组织畸形，吸收和光合作用功能不全，分化能力低，难以继代、扩大繁殖；,6.,生根困难，难移栽成活。,艳骡闯颜腾嫡衙浅生驮睡种临岂蚜窃纂金寓帝玫企经悲摇斧拷斥缩貉牲兔第四章外植体的接种与培养第四章外植体的接种与培养,一玻璃苗的形态解剖与生理特点1.玻璃苗是植物组织培养中出现,25,二玻璃苗发生的因素,1.玻璃化不同部位的节段外植体也与玻璃化有关。可能与培养基渗透势不当有关,；,2.培养基中的激素也和玻璃化呈正相关,；,3.培养瓶内气体和外界交换不畅与玻璃化有一定的关系,；,4.高的铵态氮也是导致玻璃化的原因之一；,5.不同部位的节段外植体也与玻璃化有关。,弊脾板黑