,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实 验 十,细菌生化实验,一、实验目的,1、证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。,2、掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。,3、了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。,4、掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。,5、了解IMViC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。,二、实验原理,1、微生物对生物大分子的分解利用,淀粉水解：,淀粉酶,油脂水解,：脂肪酶,明胶液化,：蛋白酶,石蕊牛乳试验,：产酸、产碱、胨化、酸凝固等。,2、糖发酵试验,产酸：,溴甲酚紫指示剂,大肠杆菌：,产气肠杆菌：,产气,：杜氏小管检测,大肠杆菌：,产气肠杆菌：,3、IMViC试验,IMViC试验,吲哚试验：,甲基红试验（M.R.试验）：,伏-普试验（乙酰甲基甲醇试验）：,柠檬酸盐试验：,色氨酸酶：,色氨酸,吲哚对二甲基氨基苯甲醛,玫瑰吲哚（红色）,大肠杆菌：,产气肠杆菌：,产酸能力：,强，甲基红变红；弱：甲基红不变色,大肠杆菌：,阳性,产气肠杆菌：,阴性,葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇2,3-丁二醇,乙酰甲基甲醇OH,二乙酰精氨酸的胍基红色化合物,大肠杆菌：,阳性,产气肠杆菌：,阴性,能否利用柠檬酸作为碳源,大肠杆菌：,阴性,产气肠杆菌：,阳性,三、实验材料,1、菌种：枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌（,Pseudomonas aeruginosa,），普通变形杆菌（,Proteus vularis,），产气肠杆菌。,2、培养基：固体油脂培养基，固体淀粉培养基，明胶培养基试管，石蕊牛奶试管，尿素琼脂试管、葡萄糖发酵培养基试管和乳糖发酵培养基试管各3支，普通变形杆菌（内装有倒置的德汉氏小管），蛋白胨水培养基，葡萄糖蛋白胨水培养基，柠檬酸盐斜面培养基，醋酸铅培养基。,3、溶液或试剂：革兰氏染色用卢氏碘液（Lugols iodine solution），甲基红指示剂，40%KOH，5%-萘酚，乙醚，吲哚试剂等。,4、仪器或其他用具：无菌平板，无菌试管，接种环，接种针，试管架。,四、实验步骤,1、细菌水解大分子物质试验,淀粉水解试验,培养基：,淀粉培养基平板,菌种：,大肠杆菌和枯草芽孢杆菌,方法：,平板上划“十”字接种,注意：,接种前在平板底部作记号；“十”字不要太大,油脂水解试验,培养基：,油脂培养基平板,菌种：,大肠杆菌和金黄色葡萄球菌,方法：,平板上划折线接种,注意：,接种前在平板底部作记号,明胶液化试验,培养基：,试管明胶培养基,菌种：,大肠杆菌或 产气肠杆菌,方法：,穿刺接种,注意：,20培养,石蕊牛乳试验,培养基：,试管石蕊牛乳培养基（2支）,菌种：,粘乳产碱菌或铜绿假单胞菌,方法：,斜面划线接种,注意：,观察结构注意牛乳产酸、产碱、凝固、胨化现象是连续出现的。,四、实验步骤,1、细菌水解大分子物质试验,2、糖发酵试验,培养基：,葡萄糖发酵培养基和乳糖发酵培养基（内装杜氏小管）（各3支）,菌种：,大肠杆菌和产气肠杆菌,方法：,分别接种于葡萄糖发酵培养基和乳糖发酵培养基,四、实验步骤,1、细菌水解大分子物质试验,2、糖发酵试验,3、IMViC试验,IMViC试验,试验名称,培养基名称,菌种名称,接种方式,接种,管数,吲哚试验,蛋白胨水培养基,大肠杆菌和产气肠杆菌,液体,1,甲基红试验,葡萄糖蛋白胨培养基,液体,1,伏普试验,葡萄糖蛋白胨培养基,液体,1,柠檬酸盐试验,柠檬酸盐培养基,斜面,1,五、实验报告,1、分别记录试验菌种对淀粉水解、脂肪水解、明胶液化、石蕊牛奶及尿素试验的结果。以“”表示阳性，“”表示阴性。,2、记录大肠杆菌及普通变形杆菌对葡萄糖和乳糖的发酵试验结果。以“+”表示产酸或产气，“”表示不产酸或不产气。,3、记录大肠杆菌和产气杆菌的吲哚试验、甲基红试验、伏-普试验、柠檬酸盐试验及硫化氢试验结果，以“+”表示阳性反应。“”表示阴性反应。,4、不利用碘液，你怎样证明淀粉水解的存在？,五、实,验,验报告,5、假,如,如某种,微,微生物,可,可以有,氧,氧代谢,葡,葡萄糖,，,，发酵,试,试验应,该,该出现,什,什么结,果,果？,6、为,什,什么大,肠,肠杆菌,的,的甲基,红,红反应,阳,阳性，,而,而产气,肠,肠杆菌,为,为阴性,？,？这个,试,试验与,伏,伏普,试,试验最,初,初底物,与,与最终,产,产物有,何,何异同,之,之处？,7、说,明,明在硫,化,化氢试,验,验中醋,酸,酸铅的,作,作用，,可,可以用,哪,哪种化,合,合物代,替,替醋酸,铅,铅？,谢谢观,看,看,/,欢迎下,载,载,BYFAITHI MEANAVISIONOFGOODONECHERISHES ANDTHEENTHUSIASMTHAT PUSHESONETOSEEKITSFULFILLMENTREGARDLESSOFOBSTACLES.BY FAITH IBYFAITH,