单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,中药制剂分析中新方法与新技术,中药制剂分析中新方法与新技术,第1页,1,当代色谱技术,顶空气相色谱法,（液上气相色谱法、顶空分析法）,对样品,基质上方,气体成份,进行,GC,分析来测定这些组分在原样品中含量,顶空气相色谱分类,静态顶空,GC,动态顶空,GC,中药制剂分析中新方法与新技术,第2页,1,当代色谱技术,顶空气相色谱法,主要特点,样品前处理简单,检测限低,可分析含量低、组成复杂样品,适合用于易挥发或易分解或无法直接进样分析液体或固体样品分析,中药制剂分析中新方法与新技术,第3页,1,当代色谱技术,顶空气相色谱法,应用实例,静态顶空,GC(,内标法,),测定血液中乙醇含量,对照品溶液制备,将,10g/l,乙醇贮备液稀释,10,倍，精密吸收此,液,1ml,置于,10ml,顶空样品瓶中，同时精密加,1ml,内标溶液（,0.25%,正丙醇水溶液），快速密封，即得。,样品制备,精密吸收,1ml,充分混匀血样转移至,10ml,顶空样品瓶中，,同时精密加,1ml,内标溶液（,0.25%,正丙醇水溶液），快速密封，,即得。,色谱条件（略）,顶空分析条件,平衡温度为,50,，平衡时间为,10,分钟（快速搅拌下），,阀、输送管及定量管温度为,80,，加压为,13.8kPa,，加压时间、充,样时间和压力平衡时间均为,0.15,分钟，定量管为,1.0ml,。,中药制剂分析中新方法与新技术,第4页,1,当代色谱技术,超高效液相色谱,（,UPLC,，,Ultra Performance Liquid Chromatography,）,主要特点,固定相,双（三乙氧基硅）乙烷在硅胶中形成桥式乙基基团,颗粒粒度小，仅为,1.7,m,耐压，颗粒度分布范围很窄,装柱,检测器,响应快,样品池,10mm,光程（与普通,HPLC,相同）而体积只有,500nL,（普通,HPLC,20,分之一）,优点,更高分析速度，更加好分离效果和更高灵敏度，速度、灵敏度及分离度，分别是,HPLC,9,倍、,1.7,倍及,3,倍,中药制剂分析中新方法与新技术,第5页,1,当代色谱技术,超临界流体色谱,（,SFC,supercritical fluid chromatography,）,以超临界流体（低黏度、高密度以及较高扩散系数）作为流动相。,对,GC,及,HPLC,检测器均可兼容使用,适合用于分析,GC,难以处理高沸点、不挥发性样品,分离速度较,HPLC,，分离效果更加好。,应用实例,超临界流体色谱法测定怀牛膝制剂中齐墩果酸含量,中药制剂分析中新方法与新技术,第6页,1,当代色谱技术,色谱联用技术,多维色谱,如：二维薄层色谱等,气相色谱,-,质谱联用技术,气相色谱,-,红外光谱联用技术,液相色谱,-,质谱联用技术,中药制剂分析中新方法与新技术,第7页,2,高效毛细管电泳,(HPCE,high performance capillary electrophoresis),电泳,:,在电解质溶液中，位于电场中带电离子在电场力作用下，以不一样速度向其所带电荷相反电极方向迁移现象。,因为不一样离子所带电荷及性质不一样，迁移速率不一样，可实现分离。,1937,年,Tiselius(,瑞典,),利用,自由溶液电泳,将人血清提取蛋白质混合液分离出白蛋白和,、,、,球蛋白,1981,年,Jorgenson,和,Luckas,发展了,高效毛细管电泳分离分析技术,(,使用,75,m,内径石英毛细管和采取了高达数千伏电压,),，,中药制剂分析中新方法与新技术,第8页,2,高效毛细管电泳,各种电性离子在毛细管柱中迁移速度为：,+,=,电渗流,+,+ef,阳离子运动方向与电渗流一致,-,=,电渗流,-,-ef,阴离子运动方向与电渗流相反,0,=,电渗流,中性粒子运动方向与电渗流一致,可一次完成阳离子、阴离子、中性粒子分离,分离原理,电场作用下，毛细管柱中出现：,电泳现象和电渗流现象,。,中药制剂分析中新方法与新技术,第9页,2,高效毛细管电泳,仪器装置,电压：,0,30KV,。,分离柱不涂敷任何固定液，,紫外或激光诱导荧光检测器,可检测到：,10,-19,10,-21,mol/L,中药制剂分析中新方法与新技术,第10页,2,高效毛细管电泳,主要特点,优点,高分辨率：理论塔板数高达数百万块，甚至数千万块。,高灵敏度：可检测出低至,10,-21,mol/L,浓度物质。,高分析速度：可在,3,分钟内分离,30,种阴离子；,1.7,分钟分离,19,种阳离子,;4,分钟可分离,10,种蛋白质,.,试样用量少：仅需几,nL,（,10,-9,L,）试样,仪器简单，操作成本低：分析一个试样仅需几毫升流动液,中药制剂分析中新方法与新技术,第11页,2,高效毛细管电泳,常见毛细管电泳模式,毛细管区带电泳,(CZE),毛细管胶束电动色谱,(MECC),（胶束作为假固定相电动色谱）,毛细管凝胶电泳,(CGE),（凝胶作为支持物，起分子筛作用）,毛细管等电聚焦电泳,(CIEF),（用于蛋白质、多肽等两性物质分离）,毛细管等速电泳,(CITP),中药制剂分析中新方法与新技术,第12页,2,高效毛细管电泳,应用,离子分析,药品分析,手性化合物分析,氨基酸分析,核酸分析及,DNA,测序,HPCE,在,中药制剂分析中应用,生物碱测定、动物类药材判别、指纹图谱,中药制剂分析中新方法与新技术,第13页,高效毛细管电泳法测定心舒口服液中腺苷、芦丁和阿魏酸含量,对照品溶液,（略）,供试品溶液配制,取心舒口服液10 mL,，加热浓缩至约,1 mL,，,加60%甲醇定容10 mL,，,冰箱放置过夜,，,经0.45 mm滤膜滤过备用。,电泳条件,以熔融石英毛细管(50 mm 66.5 cm,，,有效分离长度58 cm)为分离通道,，,以105 mmol,/,L硼砂液为运行缓冲液,，,压力进样50 mpa,，,6 s,，,毛细管柱温度为20,，,运行电压为0 30 min:24 kV,，,30 60 min:28 kV,，,检测波长为210 nm,，,毛细管柱使用前以0.1 mol,/L,氢氧化钠溶液、注射用水和运行缓冲液依次冲洗5,5,8 min,，,每次电泳后以运行缓冲液冲洗8 min。在此条件下,，同时测定,腺苷、芦丁和阿魏酸,含量,。,（隋印等,.,中国医院药学杂志,.,25(3):232-234,）,中药制剂分析中新方法与新技术,第14页,3,原子吸收光谱,（,AAS,atom absorption spectrometry,）,工作原理,1,）,各种元素原子结构和外层电子排布不一样，,基态,第一激发态,:,跃迁吸收能量不一样,含有特征性,2,）各种元素基态,第一激发态,最易发生，吸收最强，最灵敏线。特征谱线,(,共振线,),。,3,）利用待测元素原子蒸气中基态原子与共振线吸收之间关系来定量分析。,中药制剂分析中新方法与新技术,第15页,3,原子吸收光谱,工作原理,中药制剂分析中新方法与新技术,第16页,3,原子吸收光谱,原子吸收光谱仪,锐线光源,空心阴极灯,中药制剂分析中新方法与新技术,第17页,3,原子吸收光谱,原子吸收光谱仪,原子化系统,将试样中离子转变成原子蒸气。,原子化方法,火焰法,无火焰法,电热高温石墨管，激光,冷原子化法,单色器（,色散元件（棱镜、光栅），凹凸镜、狭缝等）,检测系统（,光电池、光电倍增管、光敏晶体管,）,中药制剂分析中新方法与新技术,第18页,3,原子吸收光谱,优缺点,优点,：原子化程度高，试样用量少（,1,100L,），可测固体及粘稠试样，灵敏度高，检测限,10,-12,g/L,。,缺点,：精密度差，测定速度慢，操作不够简便，装置复杂。,中药制剂分析中新方法与新技术,第19页,4,中药指纹图谱,从整体上评价中药内在质量,中药指纹图谱建立标准,尽可能多覆盖全貌,特征显著，专属性强，重现性好,方便操作与应用,中药制剂分析中新方法与新技术,第20页,4,中药指纹图谱,中药（化学）指纹图谱判别,标准图谱建立,中药材选择,选取经品种判定,正品优质地道药材,，确定图谱特征参数。另搜集,多产地,，具充分代表性，符合药用规格样品，对图谱特征重现性进行考查。随之搜集一些,易混同,或曾出现,伪品,，以所确定特征若能加以区分和识别，则更为理想。,试验样品制备,可依据药材所含成份选定，尽可能考虑对不一样成份,兼容性,，通常见不一样极性溶剂,2,3,种，制成供试品，供一组图谱综合判定应用。,注意取样代表性与均匀性,。,中药制剂分析中新方法与新技术,第21页,4,中药指纹图谱,中药指纹图谱判别,标准图谱建立,检测方法,当代光谱（红外光谱，紫外光谱）,色谱（气相色谱、薄层色谱、高效液相色谱、毛细管电泳）,其它（,X,光衍射）,中药制剂分析中新方法与新技术,第22页,4,中药指纹图谱,中药指纹图谱判别,指纹图谱解析,研究指纹图谱中特征信号归属,各指纹图谱相关性研究,直观比较,相对指数、重合率、八强峰等量化数据,计算机辅助中药指纹图谱相同度计算软件,中药制剂分析中新方法与新技术,第23页,4,中药指纹图谱,酸醇提取液中紫外吸收成份,HPLC,分析（,=254 nm,）,二甲亚砜提取液中可见吸收成份,HPLC,分析（,=451 nm,）,体外培育牛黄与天然牛黄指纹图谱比较研究,(,丁岗等,.,中国天然药品,2(5)309-312,）,中药制剂分析中新方法与新技术,第24页,5,其它技术,用生物检定法来评价中药质量,例,1,：用生化指标评价中药质量与药效相关性更,为亲密，以,淀粉酶活力,比较测定鸡内金、,鸽内金、鹌鹑内金比活力，提出了量化,数据。例,2,：利用大蒜提取物中大蒜辣素和大蒜新素具,有,抗菌作用,这一特点，用生物检定方法进,行检测，结果与气相色谱法测定结果一致。,中药制剂分析中新方法与新技术,第25页,