,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,微生物感染的病原学检查,Laboratory Diagnosis of Microbial Infections,微生物感染的病原学检查Laboratory Diagno,标本采集,无菌操作,选感染部位,最佳时间采集,检测抗体，取双份血清,注意事项,冷藏速送,病毒标本,-,可置于,50%,甘油缓冲盐水中,-,用抗生素处理分离培养的标本,标本采集 无菌操作注意事项 冷藏速送,第一节 细菌感染的微生物学检查法,第一节 细菌感染的微生物学检查法,一、细菌及其抗原的检查,1,细菌检查的一般程序,脓,/,痰,/,尿,涂片、染色、镜检,生化反应,标本 分离培养,纯培养,Ag-Ab,反应,血、脑脊液,增菌 （,Ab,菌,?,）,一、细菌及其抗原的检查 1细菌检查的一般程序,2.,细菌抗原的检测（,AbAg,？,）,SPA,协同凝集试验,金葡菌,SPA-IgG+Ag,？,反向间接血凝试验：,RBC-Ab+Ag,？,ELISA,双抗体夹心法,Ab+Ag,？,+Ab,*,+,底物,2.细菌抗原的检测（AbAg？）SPA协同凝集试验,二、核酸的检测,1.,核酸分子杂交技术,2.,多聚酶链反应（,PCR,）,二、核酸的检测1.核酸分子杂交技术,核酸分子杂交技术,斑点杂交,Southern,印迹杂交,Northern,印迹杂交,原位杂交,核酸分子杂交技术 斑点杂交,三、特异性抗体的检测,(,AgAb,？,）,特异性,IgM,：早期诊断,双份血清标本,急性期,恢复期,*,后者比前者抗体效价,4,倍有意义,三、特异性抗体的检测(AgAb？）特异性IgM：早期诊,第二节 病毒感染的微生物学检查法,第二节 病毒感染的微生物学检查法,病毒及其抗原检测,显微镜观察,分离培养与鉴定,AbAg,?,核酸检测,特异性,Ab,检测,病毒及其抗原检测,一、显微镜检查,1.,电镜,/,免疫电镜,2.,光镜：,包涵体,/,多核巨细胞等,一、显微镜检查1.电镜/免疫电镜,二、病毒的分离培养与鉴定,(,一,),动物接种,选敏感动物,适宜途径,乙脑病毒,小白鼠脑内,牛痘苗病毒,家兔角膜,观察发病情况,标本检测,二、病毒的分离培养与鉴定(一)动物接种,(,二,),鸡胚培养,选择胚龄,/,接种途径,标本检测,绒毛尿囊膜,1013d,尿囊腔,911d,卵黄囊,58d,羊膜腔,1012d,(二)鸡胚培养 选择胚龄/接种途径绒毛尿囊膜1013d尿,（三）,组织培养,(,器官,/,组织,/,细胞,),1.,细胞培养类型,(1),原代细胞培养,动物,/,鸡胚,/,人胚组织,剪碎,/,胰酶,单个细胞,培养液,单层细胞,(,原代细胞,),胰酶,次代细胞,（三）组织培养(器官/组织/细胞)1.细胞培养类型动物/鸡胚,(2),二倍体细胞培养,50,代,，保持二倍体性质,(3),传代细胞培养,无限传代，突变的二倍体细胞,/,癌细胞,(2)二倍体细胞培养,2.,病毒在细胞内增殖的鉴定指标,(1),细胞病变效应,(cytopathic effect,CPE),细胞圆缩,脱落,2.病毒在细胞内增殖的鉴定指标(1)细胞病变效应(cy,细胞,融合、包涵体,细胞融合、包涵体,(2),红细胞吸附,(hemadsorption),病毒,(HA):,流感,V/,副流感,V,细胞,细胞,(HA),细胞,(HA)+RBC,红细胞吸附现象,Cell,(2)红细胞吸附(hemadsorption)病毒(HA),(3),红细胞凝集,(hemagglutination),病毒,(HA):,流感病毒,/,乙脑病毒,细胞,病毒释放至培养液中,培养液,+RBCRBC,凝集,(3)红细胞凝集(hemagglutination)病毒,(4),病毒干扰作用（,viral interference,）,病毒,1,细胞,CPE(-),病毒,2,细胞,CPE(+),干扰现象,:,病毒,1(,风疹病毒,),先感染,细胞（猴肾细胞）,CPE(-),后感染,病毒,2(ECHO,病毒,),意义：可检查不引起,CPE/,血凝,/,血吸的病毒,？,(4)病毒干扰作用（viral interference）,（,5,）空斑形成试验（,test of plaque formation,）,稀释病毒,单层细胞,覆盖一层营养琼脂,37,，,3,5d,空斑,测定病毒数量：,PFU(plaque formation unit)/ml,（5）空斑形成试验（test of plaque forma,三、检测病毒抗原,1.,免疫荧光法,直接法：,Ag,?,-Ab,*,间接法：,Ag,?,-Ab-,抗,Ab,*,三、检测病毒抗原1.免疫荧光法,2.ELISA(,双抗体夹心法,),Ab+Ag,?,+Ab,*,+,酶底物,显色,3.,反向间接血凝法,RBC-Ab+Ag,?,血凝,2.ELISA(双抗体夹心法),四、检测抗体,患者,/,人工免疫后血清中,Ab,增长情况,取双份血清,急性、恢复期,增高,4,倍有诊断意义,IgM:,病毒感染早期,四、检测抗体 患者/人工免疫后血清中Ab增长情况,1.ELISA(,间接,法,),Ag+Ab,?,+,抗球蛋白,*,+,酶底物,显色,1.ELISA(间接法)Ag+Ab?+抗球蛋白*+酶底物显,2.,蛋白印迹法（,Western Blot,）,病毒,Ag,电泳,(SDS-PAGE),转移至硝酸纤维素膜,加,Ab,?,加抗,Ab,*,加底物,显色,2.蛋白印迹法（Western Blot）病毒Ag电,3.,血凝抑制试验,原理,:,病毒,(HA)+Ab,?,+RBC,血凝抑制,4.,间接血凝试验,RBC-Ag+Ab,?,血凝,3.血凝抑制试验原理:,五、病毒基因的检测,(,一,),核酸分子杂交,(,二,),多聚酶链反应,(Polymerase chain reaction,PCR),五、病毒基因的检测(一)核酸分子杂交,小 结,1.,病原学检查内容：,病原菌,/,抗原,/,抗体,/,基因,2.,基因检测方法：核酸分子杂交,/PCR,小 结1.病原学检查内容：,