单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,遗 传 学省 级 精 品 课 程,实验六 果蝇的三点测交,湖州师范学院 生命科学学院生物系,雌,雄,一、实验目的,1、掌握三点测交的原理及方法；,2、学习三点测交的数据统计处理及分析方法；,3、了解绘制遗传学图的原理和方法,二、实验材料,黑腹果蝇,(,Drosophila,melanogaster,),品系：,野生,型果蝇（+）：红眼、长翅、直刚毛,三隐性,果蝇（,wmsn,3,）：白眼、小翅、焦刚毛,三隐性个体,：,白眼（,w,）、小翅（,m,）、焦刚毛（,sn,3,），,这三个基因都位于,X染色体,上。,三、实验仪器设备、药品,体视显微镜、恒温培养箱、培养瓶、麻醉瓶、毛笔、滤纸、培养皿等。,乙醚、玉米粉、琼脂、红塘、酵母粉、丙酸等。,位于同一条染色体上的基因是连锁的，而同源染色体上的基因之间会发生一定频率的交换，使子代中出现一定数量的重组型。,重组型出现的多少反映出基因间发生交换的频率的高低。,而根据基因在染色体上直线排列的原理，基因交换频率的高低与基因间的距离有一定的对应关系。,基因图距就是通过基因间重组值的测定而得到的。,如果基因座位相距很近，重组率与交换率的值相等，直接将重组值作为基因图距；如果基因间相距较远，两个基因间往往发生两次以上的交换，必须进行校正，来求出基因图距。,四、实验原理,三点测交：,用野生型纯合体与三隐性个体杂交，获得三因子杂种（,F1,），再使F1与三隐性基因纯合体测交，通过对测交后（,Ft,）代表现型及其数目的分析，分别计算三个连锁基因之间的交换值，从而确定这三个基因在同一染色体上的,顺序和距离,。,通过一次三点测验可以同时确定三个连锁基因的位置，即相当于进行三次两点测验，而且能在试验中检测到所发生的双交换。,四、实验原理,四、实验原理,如果两个基因间的单交换并不影响邻近两个基因的单交换，那么预期的双交换频率应当等于两个单交换频率的乘积，但,实际,上观察到的双交换值往往,低于预期,值，因为每一次发生单交换，它邻近也发生一次交换的机会就减少，这叫,干涉,。一般用,并发率,表示干涉的大小。,并发率,观察到的,双交换频率,两个单交换,频率的,乘积,+,m sn,3,w,m sn,3,w,m sn,3,w,m sn,3,w,m sn,3,w,+,（,）,（,）,m sn,3,w,+,m sn,3,w,+,m sn,3,w,+,m sn,3,w,m,+,+,sn,3,w,+,m sn,3,w,m sn,3,+,+,w,+,+,sn,3,+,m sn,3,w,m,+,w,+,P：,F1：,（测交）,四、实验原理,雄蝇产生两种配子,雌蝇X染色体上三对基因之间,发生交换重组，产生8种雌配子,因为F1代雄蝇为三隐性个体，所以F1代雌雄蝇自交时，即测交，F2（Ft）代可以得到8种表型。,F2（Ft）中亲组合最多，而发生双交换的表现型个体数应最少。,四、实验原理,五、实验步骤,1、选处女蝇,：每组正、反交各1瓶，在,8-12h,内收集处女蝇5-6只，可提前2-3天收集。,2、杂交,：将处女蝇、雄蝇各5-6只，麻醉、转移到新的杂交瓶中，确保杂交瓶中各只果蝇完全苏醒，没有死蝇。贴好标签，注明杂交组合、日期、姓名，于25培养；,3、释放亲本,：7d后，处死杂交亲本（一定要干净）。,4、观察F1：,再过4-5天，F1成蝇出现，连续观察23天，或在处死亲本7天后，集中观察记录F1表型。,要求每组至少统计250只果蝇。,4、F1互交,：选取5-10对F1果蝇，转入一新培养瓶（不需处女蝇，正交和反交F1不能混），贴好标签，于25培养。,5、释放亲本：,7d后，杀死F1代亲本果蝇。,6、观察F2：,再过4-5d，F2成蝇出现，开始观察眼色，翅形及刚毛形态，同时记录F2各种性状果蝇的数目，连续统计7-8d。,注意：,（1）,要求每组至少统计250只果蝇。,（2）如果做正交只需统计雄性个体。,（3）统计过的果蝇放入酒精瓶中，杀死,。,五、实验步骤,六、实验报告,1、将观察到的F2代（包括正交和反交）各表型个体数填入书本P17表5-1中，确定基因间重组发生的情况；,2、计算基因间的重组值及双交换值；,3、根据计算结果画出遗传学图。注意用双交换值对位于两端的基因间距离进行校正；,4、计算并发系数和干涉值。,七、思考题,正交组合,F2,统计为什么只需统计雄性个体？其雌性个体,F2,代个体的表型如何？,内容,单因子,杂交,双因子,杂交,伴性,遗传,三点,测交,杂交蝇,处女蝇,雄蝇,处女蝇,雄蝇,处女蝇,雄蝇,处女蝇,雄蝇,正交（2人）,野生型（,长翅）,突变型（,残翅）,灰体,残翅,黑檀体,长翅,野生型,(红眼),突变型,(白小焦),突变型,白小焦,野生型,反交（2人）,突变型（,残翅）,野生型（,长翅）,黑檀体,长翅,灰体,残翅,突变型,(白小焦),野生型,（红眼）,野生型,白小焦,4个果蝇杂交实验选择的处女蝇（4人/组110921/22班）,收集处女蝇的种类,：每个杂交至少5只雌蝇。,1.,野生型15只，放1个培养瓶；,2.,残翅10只，放入1个培养瓶；,3.,黑檀体5只，放1个培养瓶；,4.,白小焦5只，放1个培养瓶。,5.,白眼5只，放1个培养瓶。,收集雄蝇的种类,：每个杂交至少5只雄蝇。,1.,野生型15只，放1个培养瓶；,2.,残翅10只，放入1个培养瓶；,3.,黑檀体5只，放1个培养瓶；,4.,白小焦5只，放1个培养瓶。,5.,白眼5只，放1个培养瓶。,内容,单因子,杂交,双因子,杂交,伴性,遗传,三点,测交,杂交蝇,处女蝇,雄蝇,处女蝇,雄蝇,处女蝇,雄蝇,处女蝇,雄蝇,正交（2人）,野生型（,长翅）,突变型（,残翅）,灰体,残翅,黑檀体长翅,野生型,（红眼）,突变型（白眼）,白小焦,野生型,反交（2人）,突变型（,残翅）,野生型（,长翅）,黑檀体长翅,灰体,残翅,突变型（白眼）,野生型（红眼）,野生型,白小焦,4个果蝇杂交实验选择的处女蝇（4人/组）,收集处女蝇的种类,：每个杂交至少5只雌蝇。,1.,野生型15只，放1个培养瓶；,2.,残翅10只，放入1个培养瓶；,3.,黑檀体5只，放1个培养瓶；,4.,白小焦5只，放1个培养瓶。,5.,白眼5只，放1个培养瓶。,收集雄蝇的种类,：每个杂交至少5只雄蝇。,1.,野生型15只，放1个培养瓶；,2.,残翅10只，放入1个培养瓶；,3.,黑檀体5只，放1个培养瓶；,4.,白小焦5只，放1个培养瓶。,5.,白眼5只，放1个培养瓶。,