单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,Wenzhou Medical College,温州医学院,检 验 医 学 院,临床检验血液学,实验十五、异常骨髓片检验（八）,血液学检验教研室,临床检验血液学实验十五、异常骨髓片检验（八）血液学检,WBC,增多骨髓片,的检验,上次实验情况,以,小组为单位，观察,WBC,增多的骨髓涂片，并,做相应的细胞化学染色,讲解细胞化学染色、实验课目的要求、注意,事项布置及实验报告内容,WBC增多骨髓片的检验 上次实验情况,（一）上次实验情况,（一）上次实验情况,（二）小组看片并做细胞化学染色,独立,观察,WBC,增多的骨髓片（,10min,）,初步印象？,下一步该做哪些细胞化学染色？,（二）小组看片并做细胞化学染色 独立观察WBC增多的骨髓片（,（三）讲解,急白的,细胞化学染色,结合,-,课件等讲解,POX,染色,结合,-,课件等 讲解N,SE,染色,+NaF,试验,结合,-,课件等 讲解,NAS-DCE,染色,复习,PAS,染色,（三）讲解急白的细胞化学染色 结合-课件等讲解,POX,染色试剂,联苯胺溶液：,联苯胺,0.3g,36%,亚硝基铁氰化钠溶液,1ml,95%,乙醇 加到,100ml,稀,H2O2 :,H2O 5ml,3%H2O2 1d,POX染色试剂联苯胺溶液：,POX,染色原理,O H2O2,联苯胺,联苯胺蓝 棕黑,/,黄色沉淀,POX,亚硝基铁氰化钠,POX染色原理O H2O2,POX,染色步骤,联苯胺液,H2O2,1-2,min,4-8,min,冲洗,冲洗,凉干,瑞氏染液,、,POX染色步骤联苯胺液H2O21-2min4-8min冲洗冲,POX,染色结果观察,-,分级,阳性结果为棕黑色。,（,-,）无阳性颗粒。,（,）颗粒细小、分布稀疏。,（,+,）颗粒较粗、常呈局灶性分布、约占胞浆,1/4,。,（,+,）颗粒粗大、分布较密、约占胞浆,1/4-1/2,。,（,+,）颗粒粗大、团块状分布、约占胞浆,1/2-3/4,。,（,+,）布满整个细胞、可覆盖核上。,POX染色结果观察-分级 阳性结果为棕黑色。,POX,染色结果观察,-,正常细胞结果,粒系：早期原粒阴性，晚期原粒以下阳性，并随,着粒细胞成熟其阳性逐渐加强。嗜酸性粒细胞阴性，,嗜碱性粒细胞阳性。,单系：单系细胞多数阴性，少数弱阳性。,网状细胞、吞噬细胞可阳性。,淋巴细胞、浆细胞、巨核细胞、有核红细胞、组织,细胞均阴性。,POX染色结果观察-正常细胞结果 粒系：早期原粒阴性，晚期,NAS-DCE,染色试剂：,固定液（甲醛）,基质液（工作液）：,氯乙酸萘酚,AS-D +,二甲基甲酰胺,亚硝酸钠液,+,盐酸副品红液,1/15M( pH7.4),磷酸盐缓冲液,1%,美兰,？,NAS-DCE染色试剂：固定液（甲醛）,NAS-DCE,染色步骤及原理,:,5min,37,30min,5min,凉干,镜检,冲洗,冲洗,冲洗,固定液,熏蒸,工作液,滴加在血膜上,美兰,滴加在血膜上,含,AS-D,萘酚,底物,细胞,NAS-DCE,释放,AS-D,萘酚,品红,固定,细胞：蓝色,复染,阳性：,红色,NAS-DCE染色步骤及原理:5min375min凉干冲洗,NAS-DAE,染色原理,醋酸,AS-D,萘酚,AS-D,萘酚,坚牢蓝,BB,NAS-DAE,篮色沉淀,NAS-DAE染色原理醋酸AS-D萘酚AS-D萘酚坚牢蓝BB,NAS-DAE,染色试剂,固定液（甲醛）。,基质液,(,分两份，其中一份加,NaF),醋酸萘酚,AS-D +,乙烯丙二醇,+,丙酮,坚牢蓝,BB,0.1M,磷酸盐缓冲液（,pH6.8,）,1%,中性红。,NAS-DAE染色试剂固定液（甲醛）。,NAS-DAE,染色步骤,甲醛,基质液,5,min,60min,冲洗,冲洗,凉干,中性红,5min,冲洗,37,凉干,凉干,镜检,NAS-DAE染色步骤甲醛基质液5min60min冲洗冲洗凉,PAS染色步骤及原理:,凉干,镜检,固定液,滴加在血膜上,HIO4,滴加在血膜上,雪夫氏液,滴加在血膜上,美兰,滴加在血膜上,5min,1,5,min,（,37,）,20,min,冲洗,冲洗,冲洗,2,min,冲洗,阳性：,红色,复染,固定,细胞：蓝色,HIO4,细胞,糖类,双醛基,无色品红,无色品红,PAS染色步骤及原理:凉干固定液HIO4雪夫氏液美兰5min,PAS染色试剂：,固定液：,95%,乙醇,10g/L HIO,4,雪夫氏液（,Schiff,）：主要由碱性品红,和偏重亚硫酸钠组成,复染液：,10g/L,美兰,PAS染色试剂： 固定液：95%乙醇,POX,等染色结果报告,阳性率（,%,）,阳性指数或阳性分布情况,阳性指数：计算方式同,NAP,积分,阳性分布,：（,+,）？,%,，（,+,）？,%,，,-,POX等染色结果报告 阳性率（%）,细胞化学染色常规注意事项,染色前要做记号，以免出现差错,固定前务必要辨认涂片的正反面,复染：用中性红或美兰复染,判断染色是否成功：涂片中有否强阳性的细胞,每一步骤的试剂必须覆盖整个个血膜,冲洗：直接流水冲洗，不要将反应液倒掉后冲洗，,以免杂质沉积,细胞化学染色常规注意事项染色前要做记号，以免出现差错,（四）目的要求,掌握：常见急性白血病的骨髓象特点。,掌握：,POX,染色、特异性酯酶染色的原理、步骤、,结果及临床意义。,熟悉：非特异性酯酶染色（包括氟化钠抑制试验）,原理、步骤、结果及临床意义。,复习,PAS,染色。,（四）目的要求掌握：常见急性白血病的骨髓象特点。,（五）实验报告,（共同完成一份实验报告）,实验名称,实验目的,实验结果,实验体会,POX,染的色原理、步骤及意义,特异性酯酶染色原理、步骤及意义,非特异性酯酶染色的原理、步骤及意义,NSE+NaF,染色的步骤及意义,PAS,染色的意义,WBC,增加的骨检报告单,（五）实验报告（共同完成一份实验报告）实验名称POX染的色原,