单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,苍南中学 许允文,*,实验,1.,大肠杆菌的培养与分离,微生物,病毒,细菌,放线菌,真菌,原生生物,原核细胞,真核细胞,非细胞结构,特点：,结构,简单,形体,微小,.,通常要用,光学显微镜或电子显微镜,才能看到，有的甚至没有细胞结构,.,一、基础知识,:,1.,微生物的种类,:,11/18/2024,2,苍南中学 许允文,关于大肠杆菌,:,革兰氏染色：,代谢类型：,主要分布：,危害：,应用：,革兰氏阴性菌（不着色）,异养兼性厌氧型,肠道,一般无害，少数有害,是基因工程中的主要受体菌之一,2,核糖体,1,阅读,P18-19,11/18/2024,3,苍南中学 许允文,2.,微生物的培养,:,1),培养基的营养成分,:,2),培养基的种类,:,碳源 氮源 水分 无机盐 生长因子,按物理性质分,液体培养基,:,扩大培养,固体培养基,:,分离、鉴定、纯化,按功能分,普通培养基：,选择培养基：筛选,鉴别培养基：鉴定,含氨卞青霉素的培养基,伊红,美蓝培养基,11/18/2024,4,苍南中学 许允文,3.,细菌的分离,:,原理,:,不同的细胞具有不同的菌落特征,;,有些微生物对抗生素、高盐等具有抗性的特点。,方法,:,划线法、涂布法,选择培养基培养,11/18/2024,5,苍南中学 许允文,二、大肠杆菌的培养与分离,实验目的,:,1,、进行大肠杆菌的,扩增,，利用,_,培养基,进行细菌培养操作。,2,、进行大肠杆菌的,分离,，利用,_,培养基,进行细菌的,划线培养,。,3,、说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理。,液体,固体,11/18/2024,6,苍南中学 许允文,一、配制培养基，调整,pH,并灭菌，倒平板备用。,按一定营养比例配制培养基,+,琼脂，融化,调整,pH,灭菌,倒平板、搁斜面,细菌,:,中性偏碱,霉菌,:,中性偏酸,1,、放走冷空气；,2,、灭菌锅压力与大气压相同时才能打开。,11/18/2024,7,苍南中学 许允文,倒平板、搁置斜面,待培养基冷却到,50,左右时，在酒精灯附近倒平板。,凝固后，倒置放置,思考：如何鉴定灭菌是否彻底？,放入培养箱中，,2d,后观察平板是否有菌落生成,11/18/2024,8,苍南中学 许允文,二、接种、扩大培养,1,、扩大培养所用的培养基是？,2,、接种的场所是？,3,、为何要等接种环冷却后，再取菌体？,11/18/2024,9,苍南中学 许允文,三、划线分离,1,、第,2,、,3,、,4,级划线前是否都要对接种环进行灭菌？,2,、下级划线开始于上一级划线的起始端还是末端？,11/18/2024,10,苍南中学 许允文,11/18/2024,11,苍南中学 许允文,四、培养,将接种后的培养皿放入恒温箱内，在,37,下倒置培养,12-24,h。,平板稀释涂布法,平板划线法,11/18/2024,12,苍南中学 许允文,平板划线分离法,用途：一般多用于从菌种的纯化；,优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离；,缺点：不能计数,稀释涂布平板法,用途：一般多用于筛选菌株。一般用于平板培养基的回收率计数。,优点：可以计数，可以观察菌落特征。,缺点：吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延。如果菌液密度大的话，长不,出单菌落。,11/18/2024,13,苍南中学 许允文,五、纯化与保存,1,、如何进一步纯化菌种？,2,、如何保存菌种？,11/18/2024,14,苍南中学 许允文,1.,培养基灭菌后，需要冷却到,50,左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？,问题讨论,答：,可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。,2.,为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？,答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。,11/18/2024,15,苍南中学 许允文,3.,平板冷凝后，为什么要将平板倒置？,4.,在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿壁的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？,答：可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成菌落的细菌随水而扩散，得不到单细胞菌落；防止杂菌污染。,答：空气中的微生物可能在皿盖与皿壁的培养基上滋生而造成污染，因此最好不要用这个平板培养微生物。,11/18/2024,16,苍南中学 许允文,5.,如何操作才可以尽量避免被杂菌污染？,6.,在培养后如何判断是否有杂菌污染？,7.,实验完成后，接触过细菌的器皿应如何处理？,操作快捷,减少操作时间,;,灭菌要彻底,降低环境污染几率,;,注意微生物生长条件,如,pH,、渗透压、温度等。,是否有不同形态的菌落；用显微镜镜检细胞、孢子、芽孢等形态。,高压蒸气灭菌,11/18/2024,17,苍南中学 许允文,8,、转基因用的质粒通常加入了如抗氨苄青霉素基因。转基因质粒转化进入大肠杆菌后，能在含有氨苄青霉素的培养基中生长，而未被转化的就不能生长，其他没有抗氨苄青霉素基因的杂菌与不能生长。如何分离转基因工程菌，并保证不被普通的大肠杆菌污染？,将菌种接种在含氨苄青霉素的培养基中培养。,11/18/2024,18,苍南中学 许允文,1,、高压蒸气灭菌,2,、灼烧灭菌,3,、紫外线灭菌,4,、过滤（去除杂菌）,思考：灭菌与消毒有何区别？,灭菌的方法：,消毒：,利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。,灭菌,:,以化学剂或物理方法消灭,所有,微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到,完全无菌,之过程。,11/18/2024,19,苍南中学 许允文,菌落,单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体,。,菌落是鉴定菌种的重要依据。,11/18/2024,20,苍南中学 许允文,