单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,现代生物学实验,实验一、,TEM,样品包埋块的制备,实验步骤,切取,1,mm,3,左右大小的组织块，立即放入,PBS（pH7.2),配制的,2.5%,戊二醛中固定,1,小时。,用,0.1,molPBS,缓冲液冲洗三次每次,510,分钟。,1,锇酸固定,1,小时，然后用缓冲液冲洗三次每次,510,分钟。,丙酮脱水：,30,50,70,80,90,100,100,每级,510,分钟,浸透：脱水剂：包埋剂,=3：1 1,小时,脱水剂：包埋剂,=1：3,过 夜,包埋,聚合：,45,o,C,12h 60,o,C,24h,磷酸缓冲液,（,Phosphate Buffer Saline,PBS）,0.2molL,-1,PBS,配制,A,液：,Na,2,HPO,4,.2H,2,O 35.61g,加,DDW,至,1000,ml,B,液：,NaH,2,PO,4,.H,2,O 27.6g,加,DDW,至,1000,ml,不同,pH,磷酸缓冲液的配制,pH 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6,A,液 18.8 24.5 30.5 36.0 40.5 43.5,(,ml),B,液,31.2 25.5 19.5 14.0 9.5 6.5,(,ml),Epon812,包埋液的配制,Epon812,树脂,20,ml,DDSA 4.6ml,MNA 15.3ml,DMP-30 0.8ml,实验二、支持膜与胶体金的制备,胶体金的制备,柠檬酸三钠法,0.01%,氯金酸（,HAuCl,4,),水溶液,100,ml,加热至沸腾，加1.5,ml 1%,柠檬酸三钠水溶液，出现橙红色。,金颗粒大小与柠檬酸三钠的关系,柠檬酸三钠（,ml)4 1.5 1.0 0.75,金颗粒的直径（,nm)15 30 50 60,胶体金与标记蛋白的配比,胶体金,pH,的调节：用,0.1,mol K,2,CO,3,调到,pH9.0,取,7,支,2,ml,离心管分别加入,1,ml,胶体金,再向每支管中加入,1,ml,不同浓度的牛血清白蛋白,混合均匀后分别加入,0.1,ml10%NaCl,混合均匀后按照下图观察颜色的变化,确定出包裹胶体金蛋白的量,胶体金与标记蛋白的比例,40 35 30 25 20 15 10,蛋白含量,mg,试验三、,TEM,、,SEM,观察,实验四、超速离心、紫外分光光度仪演示,试验五、气相、液相色谱演示,