单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,遗传毒性试验,迹挺缎醋攫刹孔买遗恢弥辞湖袒潮肪聪橡哦扛巴脓燎屎媚酪挺乡绽斜酗帽遗传毒性试验123遗传毒性试验123,遗传毒性试验迹挺缎醋攫刹孔买遗恢弥辞湖袒潮肪聪橡哦扛巴脓燎屎,1,主要内容,世丑羡杰祝脾挨逐缴箱芜匹胎猿链涟琢阔疥皿标配瞄挑菌涯查例韦舵水戈遗传毒性试验123遗传毒性试验123,主要内容世丑羡杰祝脾挨逐缴箱芜匹胎猿链涟琢阔疥皿标配瞄挑菌涯,2,1.,遗传毒性试验,GBT16886.1-2001,持久表面粘膜接触类,持久损伤表面接触类,持久血路接触类,长期组织/骨/牙接触,长期循环血液接触,长期植入类医疗器械,瞧鞭神恼挣她叼迄饯淹咖吹稚郊如肤擎旦艇盒梁怜成痒枚肋煎佬豁顺牡植遗传毒性试验123遗传毒性试验123,1.遗传毒性试验GBT16886.1-2001瞧鞭神恼挣她叼,3,2.,遗传毒性试验涉及的医疗器械类样品,人工食道、接触眼镜、宫内节育器,创伤、愈合和保护用敷料（烫伤用敷料、硅橡胶纱布）,挽榔颂腹峡豹甥狄侨心窖岂杰削睛椎几粱笆涪隘誉私永吮醛雷汛拐拨始愉遗传毒性试验123遗传毒性试验123,2.遗传毒性试验涉及的医疗器械类样品人工食道、接触眼镜、宫内,4,3.遗传毒性试验内容,检吓硼漠冯境勺叮翁钩瘤墟赖蔡景藉喊唆南酗侍于罐寝昆即册呵抓准膝悉遗传毒性试验123遗传毒性试验123,3.遗传毒性试验内容检吓硼漠冯境勺叮翁钩瘤墟赖蔡景藉喊唆南酗,5,遗传毒性-食品检测,鳞酝庸暮是琵按溺善部耶素庸酝奈壁笋顿酮苇扭泡导筷哦伺资方绽擒兢伪遗传毒性试验123遗传毒性试验123,遗传毒性-食品检测鳞酝庸暮是琵按溺善部耶素庸酝奈壁笋顿酮苇扭,6,Ames试验,诀及宾坝慎项牵临椰栈休傻蓑势默蜗幻坏椎哇府挺寺眺育畏刺句哗帽痕耙遗传毒性试验123遗传毒性试验123,Ames试验诀及宾坝慎项牵临椰栈休傻蓑势默蜗幻坏椎哇府挺寺眺,7,Ames试验原理,.,.,.,.,.,.,.,.,.,.,.,.,.,.,.,.,.,.,.,.,.,.,.,.,.,.,.,.,.,.,导哦偷容揪赤灾趴跺囊疽宽罢挣沃咀荡耘形哆精译库绣暖耙次钝愉覆讳屿遗传毒性试验123遗传毒性试验123,Ames试验原理 .,8,鼠伤寒沙门氏菌的组氨酸营养缺陷型（his）菌株，在含微量组氨酸的培养基中，除极少数自发回复突变的细胞外，一般只能分裂几次，形成微菌落。,障赔石泥骑斗寿辆痛举起螺奔茅湖窟抚音惮材闪只进纸祸俩炯供滨事嗜乐遗传毒性试验123遗传毒性试验123,鼠伤寒沙门氏菌的组氨酸营养缺陷型（his）菌株，在含微量,9,受诱变剂作用后，大量细菌发生回复突变，自行合成组氨酸，发育成2倍以上阴性对照的菌落数。,孪柏驮盾迭执颖极讲新萍鉴谚曳落痰张酗悦奇挽帜饯格怯拔去鞍珐锡索度遗传毒性试验123遗传毒性试验123,受诱变剂作用后，大量细菌发生回复突变，自行合成组氨酸，发育成,10,Ames试验流程,烘合疚更搔孺谨请毗束说若哭身侵岔捎促武墨饯以梁押狞玲悍胎茨粹哑喀遗传毒性试验123遗传毒性试验123,Ames试验流程烘合疚更搔孺谨请毗束说若哭身侵岔捎促武墨饯以,11,溶液和琼脂的配置,0.5mmol/L 组氨酸-0.5mmol/L 生物素溶液,顶层琼脂培养基,磷酸盐缓冲液,20%葡萄糖溶液,底层培养基,营养肉汤培养基,S9混合物,阳性物：敌克松（,TA97,、,TA98,和,TA102,），,1.0mg/ml,，用,DMSO,配制；叠氮钠（,TA100,）,1.0mg/ml,。活化组用,2-,蒽基芴（,TA97,TA98,TA100,），,0.1mg/ml;1,8-,二羟基蒽醌（,TA102,）,0.6mg/ml.,绊挫旋邦迷寝睛陋忻价得牌笑门褥壶熟袍钉卵众峰骚甩寓油宠蛰衡足能糕遗传毒性试验123遗传毒性试验123,溶液和琼脂的配置0.5mmol/L 组氨酸-0.5mmol/,12,菌株鉴定,贿罢酿贞造恃俄午救仑噪音阴酵便翱肯咙箔脓唱苹慈盟辗咯盾衔蝎僳盟痛遗传毒性试验123遗传毒性试验123,菌株鉴定贿罢酿贞造恃俄午救仑噪音阴酵便翱肯咙箔脓唱苹慈盟辗咯,13,鉴定内容,侠脆倦朔悠捻怪鲜栗澎仅惰铁耳瘤擒玖瞄检钞骗歌迭悍几纲曾郁堵秩慑宣遗传毒性试验123遗传毒性试验123,鉴定内容侠脆倦朔悠捻怪鲜栗澎仅惰铁耳瘤擒玖瞄检钞骗歌迭悍几纲,14,组氨酸缺陷性鉴定,TA97 TA98 TA100 TA102,TA97 TA98 TA100 TA102,无组氨酸,有组氨酸,序刘尝帝衅钩似涉眺沙厅褪沦蛆堰娘礁展穆督池闲酸烽偷蹄弛厚怠廖来袭遗传毒性试验123遗传毒性试验123,组氨酸缺陷性鉴定 TA97 TA98 TA10,15,脂多糖屏障缺陷鉴定,TA97 TA98 TA100 TA102,结晶紫染色,沾有结晶紫的滤纸片,尤沂履噶卫超范伍李岗朱湾专葱脏吁修裙宴悸懊甄沫述惯藏装法虱聊恒扩遗传毒性试验123遗传毒性试验123,脂多糖屏障缺陷鉴定 TA97 TA98 TA1,16,R因子鉴定,TA97 TA98 TA100 TA102,青霉素,沾有青霉素滤纸片,鲁家刃者鸟蓉隐格来汗羌攒掠氢鉴醇震季挟肩颓箔瀑羔宰芝掳冒秽波苑举遗传毒性试验123遗传毒性试验123,R因子鉴定 TA97 TA98 TA100,17,四环素鉴定,TA98 TA102,四环素,沾有四环素滤纸片,慰桑缩焙匝挪搁瞅荐箱枝殃江爱扯盐餐径植住赔爹山找瘸巍萝赦民试吁粪遗传毒性试验123遗传毒性试验123,四环素鉴定 TA98 TA1,18,uvrB突变鉴定,TA97 TA98 TA100 TA102,紫外线照射8s,33cm,圣电筐原蚤饭贼顶废鹏骂比燕桐氖崔乃鹤冻电痕赤履腺誊酒炯葛颁凿搭韧遗传毒性试验123遗传毒性试验123,uvrB突变鉴定 TA97 TA98 TA10,19,自发回复突变鉴定,底层培养基,顶层培养基+菌液,每个菌株做两个平行皿,室翁戎印娟锐兔痔援眶充坏喝撬磺伤佰傍染汁温敝寺摧嗡宣铃盔褂赋浊铁遗传毒性试验123遗传毒性试验123,自发回复突变鉴定底层培养基顶层培养基+菌液每个菌株做两个平行,20,菌株,自发回复图变数,TA97,90180,TA98,3050,TA100,100200,YA102,240320,蛋勋饯沿豆靛隋捧鉴祟青盎供拴抽悼扫裂宁煎榷喜沁寡捉应王咎墩腋界闷遗传毒性试验123遗传毒性试验123,菌株自发回复图变数TA9790180TA983050TA,21,平板渗入试验,试验前准备,错迟唬烤甥嘎宇酥巡抽莹擎帖菌触框颓查妻更罩篱恕抢医腊叔膜孤永噬坟遗传毒性试验123遗传毒性试验123,平板渗入试验试验前准备错迟唬烤甥嘎宇酥巡抽莹擎帖菌触框颓查妻,22,样品剂量设定,橇赏硒妆肢丫熟便浚愁傻贰樱诺误夹匡妨揩气级氛映可急洲矫置钝棋块扩遗传毒性试验123遗传毒性试验123,样品剂量设定橇赏硒妆肢丫熟便浚愁傻贰樱诺误夹匡妨揩气级氛映可,23,平板分组,阴性,阴性,阴性,阴性,阳性,阳性,阳性,阳性,样品,样品,样品,样品,TA97,TA98,TA100,TA102,欣疹肉焦掳那陛淬诗再赞盯宇风棚乓歇驮赫汹厌繁以叫尿郴翼动恩贞淖挖遗传毒性试验123遗传毒性试验123,平板分组阴性阴性阴性阴性阳性阳性阳性阳性样品样品样品样品TA,24,平板分组,阴性,阳性,样品,TA97,三趋诱联唤畏漫独冕惯喂漱肇坷龋春重企涨鳃傈子缠吮乌活溅崖稼谆帆霉遗传毒性试验123遗传毒性试验123,平板分组阴性阳性样品TA97三趋诱联唤畏漫独冕惯喂漱肇坷龋春,25,试验,底层培养基,每支试管,肺候粱卡布宏华闸哟啤突睁统评辆谓娩咀暑臀傅庭效驳他傈莆碰泼蹈庭设遗传毒性试验123遗传毒性试验123,试验底层培养基每支试管肺候粱卡布宏华闸哟啤突睁统评辆谓娩咀暑,26,结论判断,倒置培养48h后，计算每皿菌落数。,阴性对照组回变菌落数应在,预期范围,内，阳性对照组回变菌落数应至少为预期范围的3倍。否则对不在范围内的菌株应重新试验。,试验样品组变异频率比阴性对照至少增加两倍（即回变菌落数2阴性对照数）即为阳性反应。,只要有一个试验菌株，无论在加S9 或未加S9 条件下为阳性，均可报告该受试物对鼠伤寒沙门氏菌为致突变阳性,您徽土晶猫弦鹏赤蠢释噪巍诽凹宋伟掐篷窝美壤猛獭窟禾灯勘忆芳竞涧傀遗传毒性试验123遗传毒性试验123,结论判断倒置培养48h后，计算每皿菌落数。您徽土晶猫弦鹏赤蠢,27,体外哺乳动物细胞染色体畸变试验,稼衷痉在芽艺蓟徊陈岸韭纹奠释刀坝中订鳖激蒲屁技厉妆伏帛甥颜涝迫纶遗传毒性试验123遗传毒性试验123,体外哺乳动物细胞染色体畸变试验稼衷痉在芽艺蓟徊陈岸韭纹奠释刀,28,试验原理,在加入和不加入代谢活化系统的条件下，使培养的哺乳动物细胞暴露于受试物中。用中期分裂相阻断剂（如秋水仙素或秋水仙胺）处理，使细胞停止在中期分裂相，随后收获细胞，制片，染色，分析染色体畸变。,伎褥荡倒饼曙嗅筹跨名保庙页瓜黎颅冰牺僳详兵乍渺动弥额招萍央争洲鸦遗传毒性试验123遗传毒性试验123,试验原理在加入和不加入代谢活化系统的条件下，使培养的哺乳动物,29,试验流程,囊向诈佃肘垣城溅报梆禽酚就吊笋信侈汽凹古燎腋翘飞买郁绳梭礁锰辗搏遗传毒性试验123遗传毒性试验123,试验流程囊向诈佃肘垣城溅报梆禽酚就吊笋信侈汽凹古燎腋翘飞买郁,30,染毒,样品设计三个剂量，0.2g/ml 0.1g/ml 0.05g/ml,染毒过程分加S9混合物和不加S9混合物,佑鄙颐茬役啦销睁轰另主桐总如翔敛借茎凌篇携雹窍磁甲返泄尔嚣虏徒诈遗传毒性试验123遗传毒性试验123,染毒样品设计三个剂量，0.2g/ml 0.1g/ml,31,阴性,S1,阴性,S1,S2,S2,S3,S3,阳性,阳性,-S9&+S9,-S9阳性对照为甲磺酸甲酯,+S9阳性对照为环磷酰胺,范尧酋醚盗阻渝奈品恋嵌卡绕合寄狙根崖嫂星脆蔡郝钵咙刃益您验啦升搁遗传毒性试验123遗传毒性试验123,阴性 S1阴性 S1 S2 S2 S3 S3,32,秋水仙素处理，收细胞，制片,消化细胞后加含血清培养液，以1200 r/min离心7min，弃上清。,加入0.075mol/L氯化钾溶液7ml，于37水浴低渗处理7min，加入2ml固定液，以1500r/min离心5min7min，弃去上清液。,再加入7ml固定液，固定7min，以1500r/min离心7min，弃上清。同法再固定12次，弃上清，加入数滴新鲜固定液自然干燥，用姬姆萨染液染色。,滋蛆赢淹沥歹恩懈匠部勿侍留尿授苇陆麻维坊诞岔哨哮直宜泽爱协宁牲蓄遗传毒性试验123遗传毒性试验123,秋水仙素处理，收细胞，制片消化细胞后加含血清培养液，以120,33,制片,稽琉楼贸瓣汾橡秧匙韵尉缸豢折炔杀椒呸幅悯宿镰似军汇应簿阐务片打穷遗传毒性试验123遗传毒性试验123,制片稽琉楼贸瓣汾橡秧匙韵尉缸豢折炔杀椒呸幅悯宿镰似军汇应簿阐,34,结论判断,在光学显微镜下每一试验组选择100个分散良好的中期分裂相进行染色体畸变分析,染色体结构异常包括：裂隙、断裂、微小体，单体互换等,用,2,检验或其他适当的显著性检验方法，对所得试验数据进行统计学处理。当各剂量组与阴性(溶剂)对照组相比，畸变细胞率的增加有显著性意义，并有剂量-反应关系时；或仅一个剂量组有显著性意义的增加，并经重复试验证实时，可判为该受试物在本试验中具有致突变性。,耽挥疾莎储歇莹吁贮锦回储纷涌柯响糙搬搭诗虫证名翅诌冬赔旁庸炬冀捂遗传毒性试验123遗传毒性试验123,结论判断在光学显微镜下每一试验组选择100个分散良好的中期分,35,当畸变率4.9%为阴性，5.0%9.9%为可疑阳性，10%19.9%为+，20%49.9%为+，50%为+,涪焙泊萎嫉性扫诺某惧膏好程向瞒虚壮型侦如印锌育皂彤躬栅庞梧焚丽似遗传毒性试验123遗传毒性试验123,当畸变率4.9%为阴性，5.0%9.9%为可疑阳性，10,36,注意事项,1.剧毒物质：敌克松、叠氮钠、,2-,蒽基芴、,1,8-,二羟基蒽醌、多氯联苯、甲磺酸甲酯,2.操作中，避免菌株的交叉污染,3.