,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,微生物的分离培养,微生物的分离培养,第1页,一、目标要求,掌握微生物三种分离方法：稀释平板法；平板涂抹法；平板划线法,观察细菌、放线菌和真菌菌落形态、颜色、大小,比较和识别四大类微生物菌落形态,微生物的分离培养,第2页,二、试验材料,样品：,神农架土壤,培养基：,肉膏蛋白胨培养基（培养细菌）,高氏一号培养基（,加酚液,培养放线菌）,查氏培养基（,加链霉素液,培养霉菌）,试剂和仪器：,无菌水、无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、接种环、酒精灯、火柴、标签纸、水浴锅,2,人一小组,：,6,个培养皿，,3,支装有,9 ml,无菌水试管，,6,根,1ml,无菌吸管，,1,根无菌三角玻璃涂棒,微生物的分离培养,第3页,三、试验原理,土壤是微生物生活最适宜环境、它含有微生物所需要为一切营养物质和微生物进行生长繁殖及生存各种条件所以土壤中微生物数量和种类都很多。它们参加土壤氮、碳、硫、磷等元素循环作用。另外，土壤中微生物活动对土壤形成、土壤肥力和作物生产都有非常主要作用。所以，从土壤中微生物数量和组成情况，对发掘土壤微生物资源和对土壤微生物实施定向控制无疑是十分必要。,微生物的分离培养,第4页,四、实 验 过程,1,、微生物分离,2,、细菌、放线菌和真菌菌落特征观察,3,、四大类微生物菌落形态比较和识别,微生物的分离培养,第5页,1,、微生物分离方法,（,1,）用稀释平板法从土壤中分离真菌。（使用查氏培养基）,（,2,）用平板涂抹法分离土壤中放线菌。（使用高氏一号培养基）,（,3,）用平板划线法分离土壤中细菌。（使用牛肉膏蛋白胨培养基）,微生物的分离培养,第6页,土壤稀释液制备,1.称取土壤,10 g，,用研钵研碎放入,90 mL,无菌水三角瓶中（加入玻璃珠），振荡10,min，,即为稀释10,1,土壤悬液。,2.另取装有 9,mL,无菌水试管 5支，用记号笔编上10,2,、10,3,、10,4,。取已稀释成10,1,土壤液，振荡后静止0.5,min，,用无菌吸管吸收1,mL,土壤悬液加入10,2,无菌水试管中，并在试管内轻轻吹吸数次，使之充分混匀，即成10,2,土壤稀释液。同法依次连续稀释至10,3,、10,4,土壤稀释液。,微生物的分离培养,第7页,图1 土壤稀释液制备和稀释液取样,微生物的分离培养,第8页,1.每组取培养皿2只，即每个同学做,1,只。先在无菌培养皿底部贴上标签，注明分离菌名、稀释度、组别、班级。,2.另取一吸管，以无菌操作法吸收10,3,或10,4,土壤稀释液,0.2mL，,加在无菌培养皿一边，在皿另一边加入2滴,10,酚。此时两液严防相混。,3.取已熔化在水浴锅中保温,45,50,0,C,左右查氏培养基，分别倒入上述培养皿中（,见图2,），轻轻转动培养皿，使菌液、,10,酚、培养基充分混匀铺平，放在平坦桌面上，凝固后，倒置于28,0,C,恒温培养。,（,1,）稀释平板法（使用查氏培养基）,微生物的分离培养,第9页,微生物的分离培养,第10页,（,2,）平板涂抹法（使用高氏一号培养基）,1.,每组取无菌培养皿2只（每个同学做,1,只）。在皿底贴上标签，注明分离菌名、稀释度、组别、班级。,2.,以无菌操作法先在培养皿中加入重铬酸钾溶液溶液2滴，取已熔化高氏一号培养基，分别倒入培养皿，使培养基与重铬酸钾溶液充分混匀，铺平，制成平板。,3.,凝固后，另取一支吸管吸收10,3,或10,4,土壤稀释液0.2,mL,放在平板上。,4.,用无菌三角玻棒将稀释液在平板表面涂抹均匀。倒置于28,0,C,条件下培养。,微生物的分离培养,第11页,微生物的分离培养,第12页,（,3,）平板划线法（使用牛肉膏蛋白胨培养基）,1.,每组取无菌培养皿2只，在皿底贴上标签，注明事项。取已熔化牛肉膏蛋白胨培养基，倒入平皿，制成平板。,2.,凝固后，用接种环取对应菌液一环（10,3,或10,4,）在平板上划线。,连续划线法：,将挑取有样品接种环在平板培养基表面作连续划线。,3.,划线完成，盖上皿盖，倒置于,37,0,C,温室培养。,微生物的分离培养,第13页,微生物的分离培养,第14页,2,、试验结果观察与统计,（,1,）牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌,)24 h,和,48 h,各观察一次，统计菌落形态、颜色、大小；,（,2),查氏培养基（培养真菌）,48 h,观察真菌菌落形态以及计数菌落。并计算出每,g,土壤中真菌数量。即用某一培养皿内真菌菌落数乘以该培养皿接种液稀释倍数即得；,（,3,）高氏一号培养基（培养放线菌）,100,120h,观察菌落形态及计数菌落，并计算出每,g,土壤中放线菌数量（方法同上）。,微生物的分离培养,第15页,3,、四大类微生物菌落形态比较和识别,区分和识别各大类微生物通常包含,菌落形态（群体形态）和细胞形态（个体形态）,两方面观察。,菌落形态：,菌落表面湿润：,细菌薄而小，酵母菌厚而大。,菌落表面干燥：,放线菌密而小，霉菌松而大。,细胞形态：细菌小而分散 酵母菌大而分散 放线菌丝状细 霉菌丝状粗,微生物的分离培养,第16页,图,4,细菌菌落形态。（,a,）肉眼观察细菌菌落形态多变性。菌落总体形状和边缘情况可由菌落上方俯视观察。而菌落高度则由平板边缘水平观察。,微生物的分离培养,第17页,表,1,微生物的分离培养,第18页,五、试验任务,1,、,2,个培养皿倒查氏培养基（稀释平板法分离真菌）,2,、,2,个培养皿倒高氏培养基,(,三角玻棒涂布法分离放线菌）,3,、,2,个培养皿倒牛肉膏蛋白胨培养基（划线法分离细菌）,课后任务：试验结果观察与统计,微生物的分离培养,第19页,六 作业,二,.,思索题,1,、什么叫无菌操作？平板培养时为何要把培养皿倒置？,2,、分离放线菌和真菌为何需要分别加重铬酸钾和链霉素？,3,、假如用牛肉膏蛋白胨培养基分离一个对青霉素含有抗性细菌，你认为应怎样做？,一,.,结果菌落观察结果统计表,微生物的分离培养,第20页,