,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,课题,1,菊花的组织培养,组织培养,是指在,人工培养基,植物的器官、组织、细胞和原生质体，并使其生长、增殖、分化以及再生植株的技术。,1,一、基础知识,1,、植物的组织培养,（,1,）细胞的分化,概念：,在,个体发育,中，,相同细胞,的后代在形态、结构、生理功能上发生,稳定性差异,的过程,.,过程：,如：受精卵增殖、生长、分化形成组织、器官、系统,.,2,特点：,B.,稳定性：,C.,全能性：,A.,持久性：,是一种持久性的变化，它发生在生物体的整个生命过程中,在胚胎期到达最大限度.,细胞分化是稳定的，一般是不可逆转的,.,已分化的细胞，仍具有发育的潜能,.,3,原因：,遗传信息的执行情况不同,(,选择性表达,),结果：,形成不同的细胞和组织,（,2,）细胞的全能性,定义：,生物体的细胞具有使后代,细胞形成完整个体的潜能,的特性,.,原理：,生物体的,每一个细胞都,包含有该物种所特有的,全套遗传物质,，都有发育成为完整个体所必需的全部基因,.,4,高度特化的,动物,细胞，从整个细胞来说，全能性受到限制。但它的细胞核仍然保持着全能性，这是因为细胞核内含有该物种遗传性所需要的遗传物质,.,已分化的,植物,细胞，仍具有全能性,.,实例,受精卵,生殖细胞,体细胞,全能性的比较:,5,6,（,3,）植物组织培养,细胞离体,必要条件：,一定的营养物质、激素和其他外界条件,原理,:,细胞的全能性,A.外植体：从活植物体上切下进行培养的那局部细胞、组织或器官.,相关概念,:,7,B.,脱分化：,由,高度分化,的植物器官、组织或细胞产生,愈伤组织,的过程，又称去分化。,C.,再分化：,脱分化产生的愈伤组织在培养过程中重新分化,根或芽,等器官的过程,D.,愈伤组织,:,细胞排列疏松而无规则,是,高度液泡化,的、成无定形状态的,薄壁细胞,.,8,人参的愈伤组织,9,菠萝的愈伤组织,10,11,12,2,、影响植物组织培养的因素,（,1,）植物材料的选择,烟草和胡萝卜的组织培养较为容易,枸杞愈伤组织的芽诱导比较难,同一植物,材料的年龄、保存时间的长短,会影响实验结果,菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝,13,14,（,2,）离体的植物组织和细胞对营养、环境等条件的要求相对特殊，需配置不同的培养基,MS,培养基主要成分包括：,A,、,大量元素,:N,、,P,、,S,、,K,、,Ca,、,Mg,等,B,、,微量元素,:B,、,Mn,、,Cu,、,Zn,、,Fe,、,Mo,、,I,、,Co,等,C,、,有机物,、,植物激素,15,MS,固体培养基成分及比例,(P84),16,讨论：培养基各种营养物质的作用？同专题,2,中微生物培养基的配方相比，,MS,培养基的配方有哪些明显的不同？,答：,微量元素和大量元素提供,植物细胞生活所必需的无机盐；,蔗糖,提供碳源，同时能够维持培养基的渗透压；,甘氨酸、维生素,等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。,微生物培养基,以,有机营养,为主。与微生物的培养不同，,MS,培养基,则需提供,大量无机营养,，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。,17,常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素,生长素类：,2,，,4,二氯苯氧乙酸（,2,，,4,D,）、吲哚乙酸（,IAA,）、萘乙酸（,NAA,）、吲哚丁酸（,IBA,）,细胞分裂素类：,冲动素（KT）、6苄基嘌呤（6BA）、玉米素（ZT）,赤霉素类：,赤霉酸（,GA3,）,（,3,）植物激素的影响,18,生长素和细胞分裂素作用,植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势,使用顺序,实验结果,先使用生长素，后使用细胞分裂素,有利于细胞分裂，但不利分化,先使用细胞分裂素后使用生长素,细胞既分裂也分化,同时使用,分化频率高,19,生长素,细胞分裂素：,有利于,根,的分化,抑制芽的分化,生长素,细胞分裂素：,生长素,细胞分裂素,生长素,再分化,植物细胞培养,不需要光,?,需要光,21,植物组织培养的过程,离体的植物组织或细胞,愈伤组织,根和芽,完整的植物体,脱分化,再分化,22,二、实验操作,（一）制备,MS,固体培养基,MS,培养基包括,20,多种营养成分，实验室一般使用,4,。,C,保存配制好的培养基母液来制备,.,1,、配置各种母液,23,无机物中大量元素浓缩,10,倍，微量元素浓缩,100,倍，常温保存,.,激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按,1mg/ml,的质量浓度单独配制成母液,.,用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量,.,24,2,、配置培养基,分装到锥形瓶中，每瓶分装,50ml,或,100ml.,配制培养液,调,PH,培养基的分装,由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素.,25,3,、灭菌,分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌,.,1,、,选材,：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝,.,（二）外植体消毒,2,、,消毒,流水冲洗,菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗,20min,左右,.,26,酒精处理,用无菌吸水纸吸干外植体外表的水分，放入体积分数为70的酒精中摇动23次，持续67s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗.,消毒液处理,取出后用无菌吸水纸吸干外植体外表的水分，放入质量分数为0.1的氯化汞溶液中12min，取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液.,27,（三）接种,污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用,70,的酒精喷雾,使空气消毒，,酒精或新洁尔灭,搽洗工作台并用,紫外线,照射,20,分钟,1,、接种室消毒,2,、无菌操作要求,操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。,3,、材料的切取和接种,28,29,4、接种重点事项,每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为,75,的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种,.,外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜,3,4,块，菊的茎或叶,6,8,块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件,.,插入时应注意方向，,不要倒插,。,茎段、茎尖基部,插入培养基利于吸收水分和养分,.,30,思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？,答,:(,空白对照,）,每种材料或配方,至少要做一组以上的重复,。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。,31,（四）培养,1,、愈伤组织的培养,从接种外植体到出现愈伤组织需经过,2,周,时间。,2,周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白色的瘤状愈伤组织。,首次培养愈伤组织时，恒温箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈伤组织长的更快。,2,周后，培养基成分接近耗尽，必须更换培养基，进行继代培养,.,在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门翻开，让愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为绿色.,32,2,、试管苗的培养,当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养基，进行试管苗的,见光培养,.,（五）移栽,移栽生根的菊花试管苗之前，应先翻开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日.,1、翻开封口膜,2,、清洗转移,用流水清洗根部的培养基，,将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下,生活一段时间,.,33,（六）栽培,3,、移栽,珍珠岩：,固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培,.,幼苗长壮后，移栽到土壤中,.,幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花,.,34,35,三、课题延伸,1,、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易进行组织培养,.,2,、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季,.,36,(1),、培育无病毒植株,(2),、诱导离体的植物组织形成具有生根发芽能力的胚状结构，包裹上人造种皮，制成人工种子，可以解决,有些作物品种繁殖能力差，结子困难或发芽率低等问题,.,(3),、基因工程中亦需用到植物组织培养的方法,3,、植物组织培养的应用：,37,人工种子,38,同常规的无性繁殖方法相比，组织培养快速繁殖法主要具有以下优点：,（,1,）快速。,采用常规的方法如分株法，一棵花卉一年一般只能生产几株或几十株，但用组织培养的方法则每年可以繁殖出几万甚至数百万的小植株。,（,2,）周年生产。,花卉组织培养快速繁殖是在实验室中进行，因条件可控，所以不受季节限制，可以全年进行连续生产。而常规的无性繁殖则受季节限制，只能在花卉生长季节进行繁殖。,（,3,）经济效益高。,花卉组织培养快速繁殖所需要的空间小，在一个,200,平方米的培养室内一年可生产试管苗上百万株。如按每株,1,元计算，每年产值上百万元。,（,4,）以组织培养繁殖的种苗与母株有著相同的遗传基因。,所以使用这项技术可让优良的品种不断地延续。,组织培养与常规繁殖相比优点众多,39,本课题内容小结,菊花组织培养,基础知识,实验操作,植物体的组织培养,影响组织培养的因素,细胞分化,细胞全能性,组织培养过程,营养,激素,环境条件,MS,固体培养基制备,外植体消毒,接种,培养,移栽,栽培,40,作业：,P36,1,、在植物组织培养过程中，为什么要进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作。,2,、在选取菊花茎段是，为什么要选取生长旺盛的嫩枝？,外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。,植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。,41,21.以下图是植物组织培养的简略表示。据此答复：,练习1、以下图是植物组织培养的简略表示。据此答复：,（1）表示_，它能被培养成为的根本原因是_。,（2）表示_，它与相比分化程度_，全能性_.,（3）若想制成人工种子，应选用_。,（4）若是花药，则是_，继续对其使用_处理可获得_正常植株，该过程称为_。,（5）若是胡萝卜根尖细胞，则培养成的叶片的颜色为_，这说明_。,（6）若利用此项技术制造治疗烫伤、割伤的药物紫草素，培养将进行到_。,脱分化,再分化,答案：（,1,）离体的植物组织或器官 植物细胞具有全能性 （,2,）愈伤组织 低 高 （,3,）（,4,）单倍体植株 秋水仙素 纯合体 单倍体育种 （,5,）绿色 含有表达叶绿体的基因 （,6,）,42,练习,2,、基因型为,AaBb,的水稻（含,24,条染色体）的花药通过无菌操作接入试管后，在一定条件下形成试管苗，问：,（,1,）愈伤组织是花粉细胞不断分裂后形成的不规则的细胞团，愈伤组织形成过程中，必须从培养基中获得,_,等营养物质。,（,2,）要促进花粉细胞分裂生长，培养基中应有,_,和,_,两类激素。,（,3,）愈伤组织分化是指愈伤组织形成芽和根，再由芽发育成叶和茎。这一过程必须给予光照，其原因是,_,能利用光能制造有机物，供试管