Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,page,*,2010 Roche,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,page,*,2010 Roche,STRICTLY CONFIDENTIAL FOR INTERNAL USE ONLY.NOT FOR DISTRIBUTION,page,0,2010 Roche,HPV,-,DNA,检测现状及,2012,最新国际宫颈癌筛查指南,内容：,1.HPV,介绍,2.HPV-DNA,检测产品及各自特点,3.2012,最新国际宫颈癌筛查指南,HPV,介绍,根据感染组织类型分为：,皮肤组织 粘膜组织,HPV,介绍,E,：早期基因区编码早期,6,个蛋白,L,：晚期基因区编码晚期,2,个蛋白,感染后的存在状态：,状态一：非整合状态,状态二：整合到宿主细胞,http:/ HC2,原理：基于信号放大的酶标板技术的化学发光检测的核酸杂交检测方法（杂交捕获）,流程：裂解杂交捕获反应冲洗信号收集判读,时间：手工操作,3.5,小时，仪器操作,4.5,小时,结果：,检测,13,种,HPV,高危型，不分型,主要问题：与个别,HPV,亚型会发生交叉反应，无内对照，约,5%,假阳性率,DML2000,HPVDNA,检测,Hologic Cervista HRHPV,原理：基于专利,Invader,酶切信号放大技术,流程：磁珠分离核酸提取酶切信号放大荧光检测,时间：,4,小时自动化孵育,+2,小时人工操作（半自动）,结果：,14,种高危型,16,、,31,、,33,、,52,、,58,、,18,、,39,、,45,、,66,、,68,、,51,、,56,、,66,，不分型,主要问题：可能与其它,HPV,如,HPV67,和,70,发生交叉反应，从而产生假阳性结果,荧光测读仪,温度循环仪,HPVDNA,检测,Hologic Cervista(r)HPV 16/18,原理：基于专利,Invader,酶切信号放大技术,流程：磁珠分离核酸提取酶切信号放大荧光检测,时间：,4,小时自动化孵育,+2,小时人工操作（半自动）,结果：,仅对,16,、,18,分型,主要问题：可与高水平的高危型,HPV31,发生交叉反应。非常低的,HPV,感染或样本可能导致假阴性,荧光测读仪,温度循环仪,HPVDNA,检测,ROCHE PCR,多色荧光探针法,原理：基于,PCR,反应结合不同荧光染料的探针检测高危型,HPV,并对,16,、,18,分型,流程：核酸提取,PCR,扩增检测,时间：,5,小时（手工操作时间,15,分钟）,结果：,Cutoff,值，,14,种高危型，并对,16,、,18,分型,最新产品，文献见美国,ATHENA,实验（,Lancet Oncol,）,cobas 4800 HPV,检测系统,HR,16,18,Contr.,Ch1,Ch2,Ch3,Ch4,GT 16,高危型混合,(12 GT),GT 18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66,68,16,18,33,31,39,35,51,45,52,56,58,59,66,68,HPVDNA,检测,凯普,21,种人乳头状瘤病毒（,HPV,）分型检测试剂盒,原理：,PCR+,基因芯片导流杂交技术,流程：,核酸提取,PCR,扩增导流杂交显色,时间：,3.5-4,个小时（手动）,结果：,21,格某格显色即为某,HPV,亚型阳性（,13+5+3,），,对,21,种,HPV,分型（含其它,HPV,亚型）,主要问题：手工操作，易交叉污染，没有经过临床实验,HPVDNA,检测方法,亚能人乳头瘤病毒基因分型,(23,型,),检测试剂盒,原理：使用自行设计的,HPV,基因组中的特异性引物，对待测样品中可能存在的,HPV,基因型进行,PCR,扩增并进行生物素标记，再将,PCR,扩增产物与固定在芯片上的,23,个特异性探针进行特异性的分子杂交，并通过化学显色方式判读结果,(,PCR-,反向点杂交法,),流程：,核酸提取,PCR,扩增导流杂交显色,结果：膜条显色直接提示感染的,HPV,亚型，,23,种亚型（,18+5,）（含其它,HPV,亚型）,主要问题：手工操作，易交叉污染，没有经过临床实验,HPVDNA,检测,透景,luminex,原理：流式荧光技术，,PCR,产物和微球上交联的探针根据碱基互补配对的原理杂交，加入荧光标记反应，最后在流式荧光检测仪上检测荧光信号。,流程：核酸提取,PCR,扩增微球杂交荧光标记反应荧光分析,结果：,26,种亚型（,19+7,），含其它,HPV,亚型,主要问题：没有经过临床实验,SFDA,认证,FDA,认证,HPV,高危型,HPV16/18,分型,有临床研究确认,cut-off,值,仪器可扩展性,罗氏,cobas,4800,14,肿瘤靶向治疗基因突变检测,凯杰,Hc2,13,英硕力,Cervista,14,/,国产：亚能,14,无自主仪器,国产：凯普,14,无自主仪器,国产：港龙,13,无自主仪器,国产：透景,14,不详,HPV-DNA,检测主要产品对比表,2012,最新国际宫颈癌筛查指南,2012,年刊登在美国癌症学会杂志,(ACS),和美国阴道镜及宫颈病理学会杂志（,ASCCP,）,-,宫颈癌预防及早期诊断指南,2012,年，,ACS/ASCCP/ASCP,最新指南,HPV,联合细胞学筛查：,30-65,岁的妇女,Pap&HPV,ASC-US&HPV+or LSIL,NILM&HPV+,Repeat co-test,HPV16 or HPV16/18 genotyping,Colposcopy,1 year,1 year,NILM&HPV-,ASC-US&HPV-,Colposcopy,5 years,+,-,+,5 years,-,Saslow D,et al.,Am J Clin Pathol,2012;137:516-42,Cytology alone is noted as an acceptable(but not preferred)option for women 30-65 yrs old every 3 years,immediately,旧指南与新指南的区别,19,1.ASC-US triage(21 years),2.Adjunct screening(30 years),ASC-US,HPVDNA,Colposcopy,Re-screen(LBC;1 year),Negative Cytology,(NILM),+,HPVDNA,+,+,HPV16/18,Colposcopy,Re-screen(LBC 1 year),+,Screen(3 year),Re-screen(LBC 1 year),Re-screen(LBC;3 years*acceptable OR,LBC and HPV;5 years*preferred),Re-screen(5 years),co-testing(30-65 years),For women(30 65 yrs),cytology alone every 3 years is noted as an,acceptable,(but not preferred)option only,联合检测将是未来的筛查方向！,细胞学,HPV DNA,检测,联合检测,21,2012,年起，国际,ACS,，,ASCCP,，,ASCP,指南一同建议,细胞学阴性、,HPV16/18(+),的女性应立即进行阴道镜检查,2012 ACS,ASCCP,，,ASCP Guidelines,（美国癌症学会、美国阴道镜和宫颈病理学会，美国临床病理学会指南）,谢 谢！,