,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验诊断学,临床常用免疫学检测,实验诊断学,主要内容,体液免疫及细胞免疫检测,肿瘤标志物检测,自身免疫检测,主要内容体液免疫及细胞免疫检测,第八章 前言,实验诊断学按其发展水平可划分为三个阶段：,（,1,）常规形态学检查、生物化学诊断,（,2,）,免疫学诊断,自动化检测,（,3,）分子生物学,(,基因,),诊断,三者相互补充，各有其应用范围。其中，免疫学诊断因其,敏感特异、简便易行、稳定可靠,而被广泛应用，是实验诊断学的重要组成部分，可为临床诊断、鉴别诊断、疗效观察和预后判断提供特异和敏感的信息。,第八章 前言 实验诊断学按其发展水平可划分为三个阶段：,第一节 血清免疫球蛋白检测,一、,免疫球蛋白,（,immunoglobulin,，,Ig,）,的概念,免疫球蛋白是指具有,抗体活性,和,(,或,),抗体样结构,的球蛋白，由浆细胞产生，存在于机体的血液、体液、外分泌液和某些细胞的膜上，具有特异性识别抗原的功能，且必须与抗原结合后才能启动效应功能。,第一节 血清免疫球蛋白检测一、免疫球蛋白（immunogl,实验诊断学：临床常用免疫学检测课件,实验诊断学：临床常用免疫学检测课件,二、血清免疫球蛋白,分类,(,一,),正常血清免疫球蛋白,（,五大类,）,：,有,抗体活性,IgG-,含量,最多,、比例,最高,、,唯一通过胎盘的,主力抗体。,IgA-,分泌型,IgA,（,SIgA,）主控,黏膜局部免疫,，存在于,外,分泌液,中（如唾液、泪液、母乳等）。,IgM-,分子量,最大,、凝集和溶解力,最强,。,IgD-,含量,很低,功能不祥。,IgE-,含量,最低,、,亲细胞,、参与,变态反应,（如寄生虫感染、过敏性疾病等）。,二、血清免疫球蛋白分类,(,二,),异常血清免疫球蛋白,:,无,抗体活性,M,蛋白,（,M protein,）的概念：也称单克隆免疫球蛋白，是由单克隆,B,细胞增殖产生的具有,相同结构,和,电泳迁移率,的免疫球蛋白分子及其分子片段。,血清中检测到,M,蛋白即为,单克隆性免疫球蛋白增殖病,，如,多发性骨髓瘤,（,MM,，,IgG,型最常见）、巨球蛋白血症（,IgM,型）、重链病、轻链病、半分子病、恶性淋巴瘤、良性,M,蛋白血症等。,(二)异常血清免疫球蛋白:无抗体活性,（三）免疫球蛋白检测的,临床意义,免疫球蛋白是体液免疫应答中的重要产物，检测免疫球蛋白可以,反映机体体液免疫功能状态,，有助于感染性疾病、免疫增生性疾病和免疫缺陷病等的鉴别诊断、疾病监控和预后判断。,增高,多与慢性感染、自身免疫病、免疫增殖病等相关（如,IgG,增高,是再,次免疫应答,的标志，,IgG,降低,见于各种先天性和获得性体液免疫缺陷病、联合免疫缺陷病、重链病、轻链病、肾病综合症、病毒感染等；,IgM,增高,是,早期感染,的标志等，见于宫内感染，原发性巨球蛋白血症等）。,降低,多与局部感染、免疫缺陷、免疫抑制、肾病综合征等有关（如,SIgA,降低,致,反复呼吸道感染,等）。,（三）免疫球蛋白检测的临床意义,第二节 血清补体检测,补体,的概念：是一组具有,酶原活性,的糖蛋白，它由传统的,9,种成分,C1(C1q,、,Clr,，、,C1s),一,C9,，旁路途径的,3,种成分及其衍生物,B,、,D,、,P,、,H,、,I,等因子组成。补体参与机体的抗感染与免疫调节，也可介导病理性反应。,补体成分的,多少,或,缺失,可导致自身免疫病、反复感染和血管神经性水肿，对某些疾病的诊断与疗效观察极为重要。,有,三条激活途径,：传统、旁路、甘露聚糖结合凝集素（,MBL,）途径。,第二节 血清补体检测 补体的概念：是一组具有酶原活性的糖蛋,一、总补体溶血活性（,CH50,）检测,主要反映补体,经典途径,（,C1-C9,）的综合水平。,使用,溶血活性检测法,，检测终点为,50%,溶血,（,CH50,）。,增高,见于急性炎症和某些恶性肿瘤等；,减低,见于各种免疫复合物性疾病等。,一、总补体溶血活性（CH50）检测,二、补体,C3,、,C4,检测,C3,：含量,最高,，是补体系统经典激活途径与旁路激活途径的,汇合点,和,关键物质,，为,急性时相反应蛋白,。,C4,：参与经典途径，多种生物学功能。,临床意义：,（,1,）,增高,：急性炎症、传染病早期、组织损伤、,移植排斥反应,等。,（,2,）,降低,：,SLE,、,RA,、,急性肾小球肾炎,、慢性自身免疫性肝炎、肝硬化、先天性补体缺乏等。,二、补体C3、C4检测,第三节 细胞免疫检测,一、,T,细胞亚群检测,（一）,T,细胞花结形成试验,检测,T,细胞数量,原理：,T,细胞表面的特异性绵羊红细胞（,E,）受体可与绵羊红细胞结合形成,玫瑰花结,，以此,计数,T,细胞数量,，但,不能反映,T,细胞生物学功能,。,参考值：计数百分率为（,64.46.7,）,%,。,临床意义,：（,1,）,降低,：免疫缺陷性疾病，如,恶性肿瘤,、免疫性疾病、大面积烧伤、多发性神经炎、淋巴增殖性疾病等。（,2,）,升高,：甲亢、甲状腺炎、重症肌无力、慢活肝、,SLE,活动期、,移植排斥,等。,第三节 细胞免疫检测一、T细胞亚群检测,（二）,T,细胞转化试验,检测,T,细胞生物学功能,原理,：,T,细胞在体外培养过程中受,有丝分裂原,（如植物血凝素,PHA,或刀豆蛋白,A,）或,特异性抗原,刺激时可向母细胞转化，计数淋巴细胞及转化的母细胞数，求出,转化的百分率,，从而,反映,T,细胞的免疫功能,。,参考值：形态学法的转化百分率为（,60.17.6,）,%,。,临床意义,：同前，但,Down,综合征时明显升高。,（二）T细胞转化试验 检测T细胞生物学功能,（三）,T,细胞分化抗原,（,CD,）测定,1.T,细胞分化抗原,主要类别：,CD3,+,代表总,T,细胞、,CD4,+,代表,T,辅助性细胞（,Th,）、,CD8,+,代表,T,抑制性细胞（,Ts,）。,2.,临床意义,：,CD3,+,降低：,自身免疫性疾病,（,AID,），如,SLE,、,RA,等。,CD4,+,降低：,恶性肿瘤,、遗传性免疫缺陷症、,AIDS,、应用免疫抑制剂者等。,CD8,+,降低：,AID,、变态反应性疾病。,CD4,+,/CD8,+,比值,（,0.9-2.0/1,）：,增高,见于,AID,、病毒感染、变态反应、,移植排斥,等。,降低,见于,恶性肿瘤,、,AIDS,（常,300ug/l,）阳性率为,67-74%,，注意：,约,18%,不升高,；若与,-L-,岩藻糖苷酶（,AFU,）联合，原发性肝癌的诊断阳性率可高达,93.1%,。生殖腺胚胎肿瘤、胃癌或胰腺癌、病毒性肝炎、肝硬化、妊娠等均有不同程度升高。,2.,癌胚抗原（,CEA,）：一种,广谱,肿瘤标志物，,胰腺癌,90%,，,结肠癌,74%,，肺癌,70%,，乳癌,60%,（,60ug/l,），胃液和唾液,CEA,对,胃癌,有一定价值。,3.,前列腺特异抗原（,PSA,）：一种前列腺分泌的单链糖蛋白，血清总,PSA(t-PSA),明显升高，,前列腺癌,60-90%,。,4.,前列腺酸性磷酸酶,(,PAP,),：,前列腺癌,时血清,PAP,明显升高,，常提示癌症复发、转移及预后不良。,5.,游离,PSA,（,f-PSA,）：比,t-PSA,更敏感,，,f-PSA/t-PSA90%,）、,小细胞肺癌,的高特异性和高灵敏度的标志物。,12.,铁蛋白（,Ferritin,）：肝是合成铁蛋白的主要场所，增高见于,急性粒细胞白血病,，,肝肿瘤,，胰腺癌，成人斯蒂尔病等；降低见于镰刀细胞瘤，恶性肿瘤等。,13.,人绒毛膜促性腺激素,链（,-HCG,）：,恶性葡萄胎,，,绒毛膜上皮癌,，男性睾丸畸胎瘤等恶性肿瘤。,14.,人生长激素（,HGH,）：由腺垂体细胞分泌，见于,垂体瘤,（肢端肥大和巨人症）。,11.神经元特异性烯醇化酶（NSE）：在糖酵解途径中催化甘油,附：,多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统,简介,：是,现代生物技术,与,计算机技术,相融合的高技术产物，具有,超微量、并行性、高通量,的特点，可以,一次性同时,检测,几十至几百种,甚至更多的蛋白抗原。,原理：试剂盒提供,生物素标记,的检测,抗体,，用来检测结合到芯片上的抗原，加入,荧光素标记,的,链霉亲和素,，检测每个点的,荧光强度,，得到相应,信号值,，由计算机分析处理得出结果。和传统方法不同的是，蛋白芯片只要一次实验就可以得到十几、数十种所有蛋白（不同组合、排列）的信息变化，在,传染病、肿瘤,及,药物筛选,方面都具有广泛的使用价值。,附：多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统,五、肿瘤标志物的,选用原则,同一种肿瘤可含多种标志物，而一种标志物可出现在多种肿瘤。,为提高肿瘤诊断的阳性率应选择,特异性,标志物或最佳,组合,。,动态检测,有利于鉴别良、恶性肿瘤，也有利于肿瘤的复发、转移和预后判断。,五、肿瘤标志物的选用原则,常见肿瘤首选标志物,原发性肝癌：,AFP+AFU,结直肠癌：,CEA,前列腺癌：,PSA+PAP,小细胞肺癌：,NSE,绒毛膜上皮细胞癌：,hcG,胰腺癌、胆道癌：,CA19-9,卵巢癌：,CA125,乳腺癌：,CA15-3,胃癌：,CA72-4,常见肿瘤首选标志物原发性肝癌：AFP+AFU,思考题：,1.,何谓,肿瘤标志物,？,2.,简述常见的,肿瘤标志物及临床意义,？详述,AFP,检测的临床意义？,3.,肿瘤标志物的,选用原则,如何？,思考题：,第五节 自身抗体检测,1.,自身耐受,-,正常情况下，机体能识别自我，对自身组织成分不产生免疫应答。,2.,自身免疫,-,当某些原因削弱或破坏机体的自身免疫耐受时，机体的免疫系统就会对自身组织成分产生免疫应答。,3.,自身免疫病（,AID,）,-,因自身免疫反应而产生的疾病称为自身免疫病。,4.,自身抗体（,autoantibody,）：,是指针对自身组织器官、细胞及细胞内成分的抗体，是,自身免疫和自身免疫病的重要特征,之一，某些自身免疫病伴有特征性的自身抗体,(,谱,),。,第五节 自身抗体检测 1.自身耐受-正常情况下，机体能识别,实验诊断学：临床常用免疫学检测课件,一、类风湿因子（,RF,）测定,1,原理,：类风湿因子（,RF,）是,变性,IgG,刺激机体产生的一种自身抗体，主要存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液内，以,IgM,型,为主，也有,IgG,、,IgA,、,IgD,和,IgE,型。,RF,与体内变性,IgG,结合形成,免疫复合物,，激活补体或被吞噬细胞吞噬，产生炎性介质导致,组织炎性损伤,，使患者发生,骨关节炎及血管炎,。,2,方法：乳胶凝集法（,IgM,型）和免疫比浊法。,3,临床意义,：类风湿性疾病时，,RF,的阳性率高达,70-90%,，其他自身免疫性疾病如：,SLE,、,RA,、硬皮病、干燥综合症等也见,RF,阳性，某些感染性疾病如结核病等也多为阳性反应。本法,特异性不高,，应予鉴别。,一、类风湿因子（RF）测定,常用方法,：,ELISA,临床意义,：,RA,特异性自身抗体，敏感性,65%,85%,，特异性为,94%,98%,；高浓度抗,CCP,抗体是,RA,发生关节侵蚀的危险因子之一，定量检测有助于判断预后。,附：抗环瓜氨酸肽抗体（抗,CCP,抗体）,常用方法：ELISA附：抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）,二、抗核抗体（,antinuclear antibody,ANA,）,1.,概念,：,ANA,是指抗,细胞核和细胞浆成分,的自身抗体总称。这种抗体,无器官和种族特异性,。,2.,方法：,间接免疫荧光法,（,IIF,），以,Hep-2,细胞或鼠肝作抗原。在荧光显微镜下可观察到不同的,荧光模型,：,均质型、核膜型（又称周边型）、颗粒型、核点型、着丝点型、核仁型,，代表不同的临床意义。,3.,临床意义,：可作为自身免