精选ppt,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,二级,三级,四级,五级,精选ppt,*,实验十一：血型鉴定及交叉配血,医学检验学院检验基础实验室,1,精选ppt,实验十一：血型鉴定及交叉配血医学检验学院检验基础实验室1精选,实验内容,一、红细胞悬液的制备,二、ABO血型鉴定（试管法,）和Rh血型鉴定,三、交叉配血（盐水介质和聚凝胺介质）,2,精选ppt,实验内容一、红细胞悬液的制备2精选ppt,临床中：,待测,制成,红细胞悬液,，待测,3,精选ppt,临床中：待测制成红细胞悬液，待测3精选ppt,一、红细胞悬液制备,常用浓度,：1%、2%、,5%,、10%。,方法,：,抗凝血 移去上层血浆待测,洗涤：剩余的红细胞中加5ML NS，混匀，洗涤 ，弃上清，此步骤重复3次，最后一次上清应清亮并全部弃去。,配制悬液。（根据要求浓度）,如：5%：洗涤后压积红细胞1滴+19滴,NS，混匀,3000r/min,5min,3000r/min,5min,4,精选ppt,一、红细胞悬液制备常用浓度：1%、2%、5%、10%。300,二、ABO血型鉴定：,（一）、正定型,（二）、反定型,5,精选ppt,二、ABO血型鉴定：（一）、正定型5精选ppt,二、ABO血型鉴定（,盐水介质,）：,一、正定型,原理：,用,特异性血型抗体,检测,被检RBC,在盐水介质中发生肉眼可见的凝集，从而测定被检RBC膜上有无与特异性血型抗体相对应的抗原，进一步判定血型。,6,精选ppt,二、ABO血型鉴定（盐水介质）：一、正定型6精选ppt,二、ABO血型鉴定：,一、正定型,方法：,1、试管法：,加标准血清1滴,（-A -B,）,加红细胞悬液1滴（5%）,混匀，离心 观察结果,1000r/min,1min,-A,-B,7,精选ppt,二、ABO血型鉴定：一、正定型加标准血清1滴加红细胞悬液1滴,二、ABO血型鉴定：,正定型,判定结果：,试管法：,轻轻摇动（或捻动）试管，使沉于管底的RBC浮起，观察有无凝集或溶血，,如上层清亮，管底有RBC凝块，轻弹管底，凝块无散开，为凝集（）；,如上层清亮，管底有RBC沉积，边缘整齐，轻弹管底，RBC浮起或成为均匀的RBC悬液，则为不凝集（一）；,若不确定，可将反应物倒在载玻片上，显微镜下观察。,注意：若上层为清亮的樱红色，考虑是否溶血,8,精选ppt,二、ABO血型鉴定：正定型8精选ppt,二、ABO血型鉴定：,二、反定型：,原理：,用,标准红细胞,检测,被检血清（血浆）,在盐水介质中发生肉眼可见的凝集，从而测定被检血清（血浆）中有无与标准红细胞相对应的抗体，进一步判定血型。,9,精选ppt,二、ABO血型鉴定：二、反定型：9精选ppt,二、ABO血型鉴定：,二、反定型,方法：,1、试管法：,加待测血清2滴,加标准红细胞悬液1滴,混匀，离心 观察结果（,方法同正定型,）,1000r/min,1min,-A,-B,10,精选ppt,二、ABO血型鉴定：二、反定型加待测血清2滴加标准红细胞悬液,11,精选ppt,11精选ppt,二、ABO血型鉴定：,结果判定：,抗A,抗B,结果,A,B,AB,O,A,(RBC),B,(RBC),结果,B,A,O,AB,正定型,反定型,12,精选ppt,二、ABO血型鉴定：结果判定：抗A抗B结果ABA,二、ABO血型鉴定,凝集强度的判断见实验指导表格,注意：,1、正反定型一致才能确定结果；,2、所用器材必须清洁干净，避免溶血，专型专用；,3、控制离心速度和时间，防止假阳性和假阴性；,4、抗原抗体比例要适当；,5、溶血时，注意结果的判定；,6、正反定型结果不一致时，不可轻易判定，需查明原因，可能有技术问题也可能有标本问题。,13,精选ppt,二、ABO血型鉴定凝集强度的判断见实验指导表格13精选ppt,Rh（D）血型鉴定,原理,：,IgM型抗D标准血清,与,被检者RBC表面D抗原,在室温条件下盐水介质中产生特异性反应，根据是否出现凝集判断是否有D抗原的存在。,14,精选ppt,Rh（D）血型鉴定原理：IgM型抗D标准血清与被检者RBC,Rh（D）血型鉴定,加抗,D血清1滴,加红细胞悬液,1滴（5%）,轻轻摇动玻片混匀，,2min内判断结果，有凝集（），无凝集需按照说明书进一步实验确认是否为阴性,15,精选ppt,Rh（D）血型鉴定加抗D血清1滴加红细胞悬液1滴（5%）轻,Rh（D）血型鉴定,注意事项：,1、按照试剂说明书操作,2、先加血清，后加RBC悬液，可通过视觉判断以免出现漏加抗D试剂导致的假阴性结果,3、观察结果时，应轻轻捻动试管，若用力摇动，可认为破坏弱凝集，误判为（一）性。,16,精选ppt,Rh（D）血型鉴定注意事项：16精选ppt,三、交叉配血,概念：供血者的血浆、红细胞与受血者的红细胞、血浆混合，观察有无凝集反应。,方法：,盐水介质法、聚凝胺介质法、微柱凝胶法,、抗人球蛋白法、酶介质法。,17,精选ppt,三、交叉配血概念：供血者的血浆、红细胞与受血者的红细胞、血浆,交叉配血：,主侧：受血者血浆+供血者红细胞,Ps,：patient serum,Dc,：donor cell,次侧：供血者血浆+受血者红细胞,Ds,：donor serum,Pc,：patient cell,18,精选ppt,交叉配血：18精选ppt,受血者,献血者,Ps,Pc,Ds,Dc,主侧,次侧,3%-5%,1%,19,精选ppt,受血者献血者PsPcDsDc主侧次侧3%-5%,一、盐水介质法,原理,：,ABO血型天然,IgM类抗体,与对应的RBC抗原特异性结合时，在盐水介质中出现肉眼可见的凝集。通过判断是否凝集，判断是否有血型不合的情况,20,精选ppt,一、盐水介质法原理：ABO血型天然IgM类抗体与对应的RBC,（一）盐水介质法,操作：,1、取两只小试管，标明主和次侧,2、主侧：受血者血浆2滴，献血者红细胞1滴,次侧：献血者血浆2滴，受血者红细胞1滴,3、混匀，离心，1000r/min,离心1min,4、观察结果：,轻轻摇动（或捻动）试管，使沉于管底的RBC浮起，观察有无凝集或溶血，,如上层清亮，管底有RBC凝块，轻弹管底，凝块无散开，为凝集（）；,如上层清亮，管底有RBC沉积，边缘整齐，轻弹管底，RBC浮起或成为均匀的RBC悬液，则为不凝集（一）；,若不确定，可将反应物倒在载玻片上，显微镜下观察。,21,精选ppt,（一）盐水介质法操作：21精选ppt,（二）聚凝胺介质法,原理：,聚凝胺,是一种高价阳离子多聚物，在液体中可产生负电荷，中和红细胞表面的负电荷，减轻细胞间排斥力，缩短红细胞距离，在离心力作用下，可使红细胞发生发生可逆性、非特异性凝集。,低离子液,可降低可增强抗原、抗体间的吸引力，促进血型抗体与红细胞膜上相应抗原结合。离心后加入,再悬液（枸橼酸钠），,可中和聚凝胺的正电荷，正常红细胞表面恢复表面的负电荷，使非特异性凝集散开，而特异性的抗原抗体结合引起的凝集仍然存在。,22,精选ppt,（二）聚凝胺介质法原理：聚凝胺是一种高价阳离子多聚物，在液体,操作步骤,按照说明书进行,23,精选ppt,操作步骤按照说明书进行23精选ppt,谢谢！,24,精选ppt,谢谢！24精选ppt,感谢亲观看此幻灯片，此课件部分内容来源于网络，,如有侵权请及时联系我们删除，谢谢配合！,感谢亲观看此幻灯片，此课件部分内容来源于网络，,