单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,DNA,的粗提取与鉴定,一、实验原理,1.,血细胞在蒸馏水中会渗透吸水过度而导致细胞膜和细胞核膜的破裂。利用此特性可得到含有,DNA,的溶液。,2.,DNA,在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。,DNA,在,物质的量浓度为,0.14 mol,L,的氯化钠溶液中的溶解度最低，,利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的,DNA,析出,。,3.,DNA,不溶于酒精溶液,，,但细胞中的,某些物质则可以溶于酒精。,利用这一原理，可以进一步,提取出含杂质较少的,DNA,。,4.,DNA,遇二苯胺（沸水浴）会变成蓝色，因此，,二苯胺可以作为鉴定,DNA,的试剂,。,二、方法与过程,1.,制鸡血细胞液（活鸡鲜血经分离或沉淀获得）,0.1,g/mL,柠檬酸钠,100,mL,活鸡鲜血,180mL,500mL,烧杯中，玻棒,搅拌,，离心、分离或静置沉淀。,2.,提取,DNA,。,取血细胞,5-10mL,20mL,蒸馏水，用玻棒沿一个方向,快速搅拌,。,纱布,过滤,：滤液中含,DNA,和其他核物质，如蛋白质。,原理：血细胞的细胞膜、核摸吸水胀破，玻璃棒,快速搅拌,，机械加速血细胞破裂。,.,提取,血,细胞核物质：,.,溶解核内的,DNA,：,滤液,2mol/L,的,NaCl,溶液,40mL,，玻棒沿一个方向,轻缓搅拌,。,.,析出,含,DNA,的粘稠物：,.,滤取含,DNA,的粘稠物：,.DNA,粘稠物的再溶解：,在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向,轻轻搅拌,，出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水（此时,NaCl,溶液的浓度相当于,0.14mol/L,）。,用多层纱布,过滤,，含,DNA,的粘稠物留在纱布上。,20mL2mol/L,的,NaCl,溶液,步骤含,DNA,的粘稠物,在,20mL,烧杯中,轻缓搅拌,3,min,，使尽可能多的,DNA,溶解在,NaCl,溶液,。,.,过滤含有,DNA,的,NaCl,溶液：,用放有两层纱布的漏斗,过滤,步骤所得的溶液，滤液中含有,DNA,。,.,提取含有杂质较少的,DNA,：,步骤所得的滤液体积分数为,95%,的冷却酒精,50mL,，用玻棒沿一个方向,轻缓搅拌,，溶液中（,析出,）出现乳白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。,3.DNA,的鉴定：,加入二苯胺试剂,4mL,，用玻棒,搅拌,使,DNA,溶解，沸水浴,5min,，观察溶液是否出现浅蓝色。,1.,共有“,三次过滤，两次析出，七次搅拌,”,2.,加入“,两次蒸馏水，,三次,NaCl,溶液,，一次酒精,”,三、实验小结,四、实验原理拓展介绍。,1.DNA,的释放。,DNA,主要在鸡血细胞的细胞核内，正常情况下不会释放出来，蒸馏水对于鸡血细胞是一种低渗液，水分可以大量进入血细胞，使之胀破，同时加上玻璃棒快速搅拌的机械作用，加速血细胞的细胞膜和核膜的破裂。但,释放出来的大量,DNA,与,RNA,、蛋白质结合在一起，即释放的不是纯净的,DNA,，常称为,DNA,核蛋白,。,2.DNA,与蛋白质分离。,在高浓度（,2mol/L,）的氯化钠溶液中，核蛋白易溶解，析出,DNA,并溶解在高浓度的氯化钠溶液中,3.DNA,的析出与获取。,因为,DNA,在低浓度（,0.14mol/L,）的氯化钠溶液中溶解度小，而蛋白质的在其中的溶解度大,。所以在向含,DNA,的高浓度的氯化钠溶液中加入大量蒸馏水稀释氯化钠溶液，从而使,DNA,溶解度下降，蛋白质溶解度增高。,4.DNA,的再溶解。,用高浓度（,2mol/L,）的氯化钠溶液再溶解,DNA,粘稠物。,5.DNA,的沉淀和浓缩。,对于除去了蛋白质的,DNA,的氯化钠溶液，必须再进一步沉淀和浓缩，常用,酒精沉淀法,。即往,含有,Na,的,DNA,溶液，加入体积分数为,95%,的冷却酒精，混匀后可以使,DNA,沉淀、浓缩，形成含杂质较少的,DNA,丝状物,，悬浮于溶液中。若丝状物较少，可将混合液再放入冰箱中冷却几分钟即可。浓缩后的,DNA,丝状物可以用玻棒（玻棒有吸附,DNA,的作用）缓缓旋转的方法卷起。,6.DNA,的鉴定。,100,DNA,二苯胺 蓝色物,鉴定时蓝色的深浅与溶液中,DNA,的含量多少有关。,方法步骤,加入物质,目的,1,.,制备鸡血细胞液,柠檬酸钠溶液,2,.,提取鸡血细胞细胞核物质,20 m1,蒸馏水,3,.,溶解细胞核内的,DNA,2 m1,L,的,NaCI,溶液,40,mL,4,.,析出含,DNA,的黏稠物,蒸馏水,5,.,滤取含,DNA,的黏稠物,6,.,将,DNA,的黏稠物再溶解,2 mol,L,的,NaCl,溶液,20,mL,7,.,过滤含,DNA,的,NaC,l,溶液,8,.,提取含有杂质较少的,DNA,冷却的,95,的酒精,50,mL,A,:,(1),向试管中加入,0,.,015 mol,L,的,NaCl,溶液,5,mL,(2),加入,DNA,(3)4,mL,二苯胺试剂,9,.,DNA,的鉴定,B,:,(1),向试管中加入,0,.,015mol,L,的,NaCl,溶液,5,mL,(2)4 m,L,二苯胺试剂,加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固,加速血细胞破裂,溶解,DNA,使,2mol/L,的,NaCl,溶液稀释至,0.14mol/L,使得,DNA,最大限度地释出,使含,DNA,的黏稠物被留在纱布上,使含,DNA,的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中,除去含,DNA,的滤液中的杂质,提取,DNA,A,出现蓝色,B,无变化,2.,实验中,NaCl,的物质的量浓度为,2 mol,L,和,0.14 mol,L,对,DNA,有何影响,?,1.,在,DNA,的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是,(),。,A.,稀释血液、冲洗样品,B.,使血细胞破裂、降低,NaCl,浓度使,DNA,析出,C.,使血细胞破裂、增大,DNA,溶解量,D.,使血细胞破裂、提取含杂质较少的,DNA,答：,B,答：前者是溶解,DNA,，,后者是使,DNA,析出,3.DNA,遇二苯胺,(,沸水浴,),会染成,(),A.,砖红色,B.,橘黄色,C.,紫色,D.,蓝色,4.,提取鸡血中的,DNA,时，为什么要除去血液,中的上清液,?,答：,DNA,的提取，关键是对杂质的去除，由于上清液是血液中的血浆部分，不含,DNA,，,所以要除去上清液,(,含有蛋白质,),。,答：,D,