单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,DNA,的粗提取与鉴定,1,、了解从细胞中提取,DNA,的基本原理,2,、初步掌握,DNA,的粗提取和鉴定的方法,3,、观察提取出来的,DNA,实验思路,1,、,DNA,从哪提取？,2,、怎样将,DNA,与细胞中的其他物质分离？,3,、怎样鉴定我们提取的,DNA,？,提取,DNA,的方法,1.DNA,在,NaCl,溶液中的溶解度，是随着,NaCl,的浓度的变化而改变的。当,NaCl,的物质的量浓度为,0.14 mol,L,时,DNA,的溶解度最低。,利用这一原理，可以使溶解在,NaCl,溶液中的,DNA,析出。,2.DNA,不溶于酒精溶液,，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的,DNA,。,3.DNA,对酶、高温、洗涤剂的耐受性。,4.DNA,遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色,，因此，二苯胺可以作为鉴定,DNA,的试剂。,二、,DNA,的粗提取与鉴定的实验设计,（一）实验材料的选取,材料：新鲜的鸡血,注意：,本实验中，,要往鸡血中加入抗凝剂,（,柠檬酸钠溶液,）,原则上只要含,DNA,的生物材料都可以，但是选取,DNA,含量相对较高的生物组织，成功率更大。,(1),先将新鲜的鸡血离心，获得鸡血细胞,(2),在鸡血细胞中加入一定量的蒸馏水，同时用,玻璃棒搅拌,，过滤后收集滤液即可,（二）破碎细胞，获取含,DNA,的滤液,讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？,利用了什么原理？,添加,柠檬酸钠,，玻棒搅拌,选材如果是洋葱等植物细胞呢？,先用洗涤剂溶解细胞膜。,洗涤剂食盐作用？,讨论：为什么反复地溶解与析出,DNA,，,能够去除杂质,答：用高盐浓度的溶液溶解,DNA,，,能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使,DNA,析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出,DNA,，,就能够除去与,DNA,溶解度不同的多种杂质,（三）去除滤液中的杂质,讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？,答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的,DNA,与蛋白质分开；方案三利用的是,DNA,和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与,DNA,分离,方案二利用了酶的专一性；方案三利用了,DNA,的稳定性。,（四）,DNA,的,析出与鉴定,DNA,的析出用的是,与滤液体积相等的,冷却的酒精溶液（体积分数为,95,）,，静置,2-3min,，,溶液中会出现,白色丝状物，,这就是粗提取,DNA,。,用玻璃棒沿,一个方向,搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水,1,、,DNA,的析出,2,、鉴定,不变蓝,对照组,溶液逐渐,变蓝,丝状物,(DNA),实验组,图示,结果,加入物质,比较,均加入：,2mol/LNaCl,溶液,5,mL,4,mL,二苯胺试剂,鉴定时蓝色的深浅与溶液中,DNA,的含量多少有关。,自变量,你能采用其他方法对,DNA,进行鉴定吗？,洋葱的鳞片叶表皮细胞,取少许丝状物，置玻片中央，,加,1,滴,甲基绿,溶液，丝状物变成,绿色。,鉴定所用的试剂是,二苯胺,或,甲基绿,。,用,二苯胺,须加热。用,甲基绿不用水浴,加热。,观察你提取的,DNA,颜色，如果不是白色丝状物，说明,DNA,中的杂质较多；二苯胺鉴定出现蓝色说明实验基本成功，如果不呈现蓝色，可能所提取的,DNA,含量低，或是实验操作中出现错误，需要重新制备,课题成果评价,（一）是否提取出了,DNA,本实验提取的,DNA,粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质,（二）分析,DNA,中的杂质,（三）不同实验方法的比较,对于不同的实验方法，本课题可以采用分组的方法进行研究。首先选取不同的实验材料，其次同种材料还可以采用不同方法，从多方面比较实验结果，如,DNA,的纯度、,DNA,的颜色、二苯胺显色的深浅等，看看哪种实验材料、哪种提取方法的效果更好,小结,1,、,DNA,的粗提取与鉴定的方法,2,、原理,3,、实验设计的步骤，原则,作业,尝试用植物细胞（如新鲜的菠菜）来做这个实验。,1.,某同学用洋葱进行,DNA,粗提取和鉴定实验，操作错误的是,(),A.,加入洗涤剂后用力进行快速、充分的研磨,B.,用蛋白酶纯化过滤后的研磨液中的,DNA,C.,加入酒精后用玻璃棒轻缓搅拌,D.,加二苯胺试剂摇匀后沸水浴加热,A,2.,在,DNA,的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是,(),。,A.,稀释血液、冲洗样品,B.,使血细胞破裂、降低,NaCl,浓度使,DNA,析出,C.,使血细胞破裂、增大,DNA,溶解量,D.,使血细胞破裂、提取含杂质较少的,DNA,答：,B,1.,共有“,三次过滤，两次析出，七次搅拌,”,2.,加入“,两次蒸馏水，,三次,NaCl,溶液,，一次酒精,”,实验小结,整个实验共,“,两次,蒸馏水，,三次过滤，两次析出，七次搅拌,”,两次,蒸馏水,第一次：,细胞吸水胀破,第一步,第二次：使,DNA,黏稠物析出 第三步,过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有关，第二次要用其滤出的黏稠物有关，所以要使用多层纱布，第一次和第三次均要用其滤液，使用的纱布为,1,2,层,三次过滤,第一次：,DNA,存在于滤液里 第一步,第二次：,DNA,被,留在纱布上 第三步,第三次：,DNA,存在于滤液里 第三步,两次析出,第一次：用,0.14 mol,L,的,NaCI,溶液含杂质多,第三步,第二次：用冷却的,95,的酒精,第四步,注 意 事 项,制备鸡血细胞液时，要在取鸡血的同时加入柠檬酸钠，静置后上层是血清，下层为所需要的血细胞。,整个实验中,加入“,两次蒸馏水，,三次,NaCl,溶液,，一次酒精,”,两次加蒸馏水的目的不同，一是涨破细胞，二是稀释溶液。,酒精最好用,95%,的冷酒精,;,加蒸馏水或加入酒精用玻棒搅拌时,动作要,轻缓且朝一个方向,。,保证,DNA,分子的完整性。,使用时注意玻璃棒不要碰到烧杯底。,鉴定,DNA,时需沸水浴加热。,二苯胺试剂要现配现用,否则会影响鉴定的效果,.,二苯胺是一种有毒性的试剂,使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位,.,盛放鸡血细胞的容器,最好是塑料容器,（鸡血细胞破碎后释放的,DNA,，容易被玻璃容器吸附，造成提取过程中,DNA,的损失）,复习巩固,:,(1),如何观察,DNA,和,RNA,在真核细胞中的分布情况,?,(2),真核细胞,DNA,的主要存在场所,?,(3),证明,DNA,是遗传物质的三个经典实验,?,(4)DNA,分子双螺旋结构模型的提出者是谁,?,(5)DNA,分子双螺旋结构模型的主要特点,?,1,、,DNA,分子由两条链组成,这两条链按反向平行的方式盘旋成双螺旋结构,.,2,、,DNA,分子中的磷酸和脱氧核糖交替连接,.,排列在外侧,构成基本骨架,碱基排列在内侧,.,3,、,DNA,分子两条链上的碱基通过氢键连接成碱基对,.,