Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,细胞融合技术,(jsh),第三节,第一页，共三十二页。,本节目标,(mbio),1,通过阅读了解,细胞融合技术的一般原理,，知道,细胞融合的几种诱导方法,(fngf),。,2,掌握细胞融合技术,在育种上的应用,，比较细胞融合技术育种与常规的杂交育种的优缺点。,3,提出自己的,单克隆抗体的制备方案,，通过讨论和相互评价，在自主探究中，掌握单克隆抗体的制备技术及应用，体验科学家的科学探索过程。,4,、,植物体细胞杂交及应用,【,重点、难点,】,1,、细胞融合技术的一般原理，知道细胞融合的几种诱导方法。,2,、单克隆抗体的制备方案。,3,、植物体细胞杂交及应用,第二页，共三十二页。,一,.,细胞融合技术,(jsh),阅读课本第,30-31,页内容，回答问题：,1.,什么,(shn me),叫细胞融合技术？,2.,常用的人工诱导细胞融合的方法有哪几种？哪一种重复性强，对原生质体伤害小，方法简单，可控性强？,用人工方法诱导细胞融合，并在一定条件下使融合细胞,分化再生,(zishng),，形成新物种或新品种的过程。,物理法,：离心、振动、,电融合技术（电刺激。伤害小，可控性强）,化学法,：用聚乙二醇（）诱导,灭活的病毒,：仙台病毒、,疱疹病毒,等,（适合动物）,第三页，共三十二页。,动物细胞,(xbo),融合（细胞,(xbo),杂交）,2,个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程,细胞,(xbo),A,细胞,(xbo),B,杂种细胞,灭活的病毒,物理法,化学法,仙台病毒,疱疹病毒,新城鸡瘟病毒,离心振动电激,聚乙二醇,融合后形成的细胞称为,杂交,细胞,第四页，共三十二页。,用灭活的病毒,(bngd),诱导动物细胞融合过程,细胞核,病毒颗粒,细胞核,第五页，共三十二页。,细胞,(xbo),电融合仪,第六页，共三十二页。,第七页，共三十二页。,抗体,(kngt),是由何种细胞产生的？,2.抗体是如何产生的？,？,二.动物,(dngw),细胞融合与,单克隆抗体,第八页，共三十二页。,读下面一段文字资料,(zlio),，思考以下问题：,长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后,从动物血清中分离出所需抗体的方法,。用这种方法获得的抗体，不仅,产量低,，而且抗体的,特异性差，纯度低，反应,(fnyng),不够灵敏,。人们发现，在,动物发生免疫反应的过程中，体内的,B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体,，但是,每个,B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体,。要想获得大量的单一抗体，必须用单个,B细胞进行无性繁殖，即克隆,。,第九页，共三十二页。,1、请从以上文字,(wnz),资料中找出单克隆抗体的概念,用单个,B细胞进行克隆，得到,(d do),的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。,（一）,单克隆抗体,(kngt),概念,第十页，共三十二页。,1,、如何,(rh,),获得化学,性,性质单一,、,、特异性,强,强的抗体,？,？,单克隆抗,体,体,(kngt),问题,(wnt),讨论,提示：,1.,什么样的,细,细胞可以,产,产生抗体,？,？,2.,什么样的,细,细胞可以,无,无限增殖,？,？,第十一页,，,，共三十,二,二页。,设计方案,：,：,一个,(y,),B淋巴细,胞,胞只,分,分泌一种,特,特异性抗,体,体,小鼠骨髓,瘤,瘤细胞,能无限,增,增殖,杂种,(zzhng),细胞,单克隆抗,体,体,(kngt),第十二页,，,，共三十,二,二页。,B淋巴细,胞,胞,注射特定,(td,ng),抗原蛋白,骨髓瘤细,胞,胞,(xb,o),培养,(piyng),骨髓瘤细,胞,胞,融合,（只考虑,两,两两融合,）,）培养液,中,中细胞有,几,几种类型,？,？融合细,胞,胞几种,类型,？,骨髓瘤细,胞,胞,-骨,髓,髓瘤细胞,B淋巴细,胞,胞-B淋巴,细,细胞,B淋巴细,胞,胞-,骨髓瘤细,胞,胞,多种,杂交细胞,在具有筛,选,选作用的,培,培养基上,培,培养,专一抗体,检,检验阳性,克隆上述,杂,杂交细胞,分开不同,杂,杂交细胞,，,，克隆专,一,一抗体，,检验阳性,细,细胞,单克隆抗,体,体,注射到小,鼠,鼠体内,体外培养,（二）、,单,单克隆抗,体,体的制备,过,过程,第,1次筛选,目,目的：得,到,到杂交瘤,细,细胞（多,种,种）。,第,2次筛选,目,目的：在,杂,杂交瘤细,胞,胞中筛选,出,出能产生,所,所需抗体,的,的杂交瘤,细,细胞。,该细胞继,承,承,双亲细胞,的遗传特,性,性，既能,产生专一,抗,抗体,又能,无限增殖,。,杂交瘤细,胞,胞有何特,点,点？,特异性强,，,，灵敏度,高,高,第十三页,，,，共三十,二,二页。,腹腔,(fqing),注射法,第十四页,，,，共三十,二,二页。,诊断疾病,（识别作,用,用,(zuyng),，如同位,素,素标记单,克,克隆抗体,，,，可诊断,肿,肿瘤、心,血,血管畸形,等,等）,（三）,单克隆抗,体,体,(kngt),的应用,优点：准确、高,效,效、简易,(jiny),、快速,用于治,疗,疗疾病和,运,运载药物,（,（,主要用于,癌,癌症治疗,，,，也可运,载,载药物，,如,如“生,物,物导弹”,）,）,（,导向作用,，,，,作为载体,，,，,生物导弹,=单克隆,抗,抗体+药,物,物，,治疗肿瘤,）,）,（位置准,确,确、疗效,高,高、副作,用,用小）,诊断乳腺,癌,癌单克隆,抗,抗体,第十五页,，,，共三十,二,二页。,小结,(xioji),两个,(lin,),过程,动物,(dngw),细胞融合,过,过程,动物细胞,培,培养过程,“一二三,”,”,二次筛选,筛选杂,交,交瘤细胞,、,、能,产生所需,抗,抗体的杂,交,交瘤细胞,一个新细,胞,胞,杂交,瘤,瘤细胞,三个优势,产量,大,大、特异,性,性强、灵,敏,敏度高(,理,理化性质,单,单一)的,优,优势,单克隆抗,体,体,第十六页,，,，共三十,二,二页。,三、,植物体细,胞,胞杂交技,术,术,(jsh),与作物育,种,种,第十七页,，,，共三十,二,二页。,杂交的两,个,个,(lin,),细胞,用纤维素酶、果胶酶处理细胞壁,（酶解法）,原生质体、,经离心、振动、电刺激,用聚乙二醇（）诱导,融合后的原生质体,再生,(zishng),细胞壁,杂种,(zzhng),细胞,脱分化,细胞分裂,愈伤组织,杂种植株,再分化,（,植物体细,胞,胞融合完,成,成的标志,）,植物细胞,融,融合,植物组织,培,培养,第十八页,，,，共三十,二,二页。,白菜,甘蓝,白菜甘蓝,第十九页,，,，共三十,二,二页。,植物体细,胞,胞,(xb,o),杂交意义,？,？,p33,细胞融合,技,技术可以,避,避免受精,过,过程，,在,亲缘关系,较,较远的物,种,种,(wzhng),间实现基,因,因转移，,创,创造出自,然,然界没有,的,的新物种,(wzhng),。,意义：克,服,服,(kf,),远缘杂交,不,不亲和的,障,障碍，,实现种间,遗,遗传物质,的,的重组,第二十页，,共,共三十二页,。,。,2、,动植物细胞,在,在结构上有,何,何区别？这,与,与它们杂交,(zji,o),或融合过程,有,有什么影响,？,？,3、植物体,细,细胞杂交诱,导,导原生质体,融,融合,(rngh),常用的方法,有,有哪些？,离心、振动,、,、电激等物,理,理方法,(fngf),；,聚乙二醇诱,导,导等化学方,法,法,问题讨论,动物细胞无,细,细胞壁，动,物,物细胞融合,过,过程中不须,去,去除细胞壁,和,和再生出细,胞,胞壁。,、植物体,细,细胞杂交最,终,终得到的是,完,完整的植物,个,个体，动物,细,细胞融合后,能,能形成杂种,动,动物个体吗,？,？,不能，只能,得,得到杂交细,胞,胞,第二十一页,，,，共三十二,页,页。,4、动物细,胞,胞融合能利,用,用,(lyng),上述两类方,法,法吗？还有,其,其他方法吗,？,？,能 ，,还,还可以,(ky),利用灭活的,病,病毒（生物,方,方法）进行,诱,诱导,问题,(wnt,),讨论,、动物细,胞,胞融合与植,物,物原生质体,融,融合的基本,原,原理是否相,同,同？,相同，都是,细,细胞膜的流,动,动性,第二十二页,，,，共三十二,页,页。,问题,(wnt,),讨论,7、,植物,(zhw,),细胞融合有,什,什么意义？,6、为什么,要,要用,灭活,的病毒,(bngd),？,病毒一般对,生,生物体是有,伤,伤害的。,仙台病毒,物理或,化学方法,丧失感染活,性,性,保留融合活,性,性,克服远缘杂,交,交不亲和的,障,障碍，,实现种间遗,传,传物质的重,组,组。,第二十三页,，,，共三十二,页,页。,免疫,(miny),小鼠,培养,(piy,ng),骨髓瘤细胞,融合,(rngh),B淋巴细胞,注射特定抗,原,原蛋白,选择培养基,上,上培养,专一抗体检,验,验阳性,专一抗体检,验,验阳性,注射到小鼠,体,体内,体外培养,单克隆抗体,克隆杂交细,胞,胞,分开不同杂,交,交细胞，克,隆,隆专一抗体,，,，检验阳性,细,细胞,多种杂交细,胞,胞,杂交瘤细胞,有,有何特点？,本过程利用,的,的那些技术,？,？,动物细胞融,合,合技术,动物细胞培,养,养技术,是否注射抗,原,原,（只考虑两,两,两融合）培,养,养液中细胞,有,有几种类型,？,？几种融合,细,细胞？,两次筛选的,目,目的分别是,什,什么？,（二）,、单克隆抗,体,体制备过程,与传统制备,的,的抗体相比,具,具有什么特,点,点？,第二十四页,，,，共三十二,页,页。,植物体细胞,杂,杂交,(zji,o),与动物细胞,融,融合的比较,细胞工程,植物体细胞杂交,动物细胞融合,实质内容,改变遗传物质、产生新的性状，获得细胞产品(使后代具有双亲的特性),理论基础,细胞膜的流动性,;,植物细胞全能性,细胞膜的流动性,;,细胞增殖,诱导手段,物理法：离心、振动、电激,化学法：聚乙二醇,物理法：离心、振动、电激,化学法：聚乙二醇,生物法：灭活的病毒,诱导过程,去细胞壁,(纤维素酶、果胶酶),原生质体融合,(获得杂种原生质体),植物细胞培养,(获得植株),获得分离的单个动物细胞,(胰蛋白酶处理),诱导融合,动物细胞培养,(细胞产品),应用,获得白菜,甘蓝等杂种植物,主要用于单克隆抗体的制备,(杂交瘤细胞),第二十五页,，,，共三十二,页,页。,1.,下图为某同,学,学根据杂交,瘤,瘤技术的方,法,法，设计,(shj,),的生产破伤,风,风杆菌的抗,体,体实验方案,2、该方案能达到预期效果吗？为什么？,4、图中B为_过程，常用_作为诱导剂，该细胞继承_的遗传特性，既能_,又能_。,1、该实验方案的目的是_,3、A是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生_,5、C过程指细胞培养，该过程包括_培养和_培养两个阶段，其中_代以内的的细胞属于细胞株。,制备,(zhb,i),单克隆抗体,B细胞,(xbo),抗体,细胞融合,灭活病毒,双亲细胞,分泌抗体,无限增殖,原代,传代,50,B,骨髓瘤细胞,杂交瘤细胞,足够数量的,细,细胞群,A,体外培养,注射到,小鼠腹腔,C,体外培养,不能，未对,小,小鼠免疫处,理,理,第二十六页,，,，共三十二,页,页。,2.人,CD20单,