,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,医学免疫学实验（三）,医学免疫学实验（三）,实验内容,1,、淋巴细胞转化试验、,E,花环形成试验,2,、补体结合、中和反应、免疫标记技术,3,、录像：淋转、,E,花环、免疫学标记技术,4,、操作：胶体金法检测,HCG,实验内容1、淋巴细胞转化试验、E花环形成试验,淋巴细胞转化实验,是检测人外周血,T,淋巴细胞功能,的体外试验。,原理,:,利用人外周血,T,淋巴细胞表面的,有丝分裂原受体,与相应丝裂原在体外结合后，可使细胞转化为淋巴母细胞，,表现为体积增大、胞浆丰富、并能进行有丝分裂,。,根据其转化的程度和转化率，可测定机体,细胞免疫功能,状态。常用的丝裂原为,植物血凝素（,PHA,）,。,正常人淋巴细胞转化率约为,70,淋巴细胞转化实验是检测人外周血T淋巴细胞功能的体外试验。,淋巴细胞转化实验,T,细胞,PHA,淋巴母细胞,（体积增大，形态不整齐，核大，松散，有核仁，胞浆变宽，出现空泡）,刀豆素,A(ConA,）,美洲商陆（,PWM,）,淋巴细胞转化实验T细胞PHA淋巴母细胞刀豆素A(ConA）,小淋巴细胞：,核质密、胞浆小、无核仁,过 渡 型：,比小淋巴细胞略大、核质,略疏松，出现核仁,淋巴母细胞：,大,4,5,倍，核质疏松，,核仁,1,3,个，核周淡染的,透明区，胞浆网状可见空泡,淋巴细胞分型,分裂相,淋巴母细胞,小淋巴细胞：核质密、胞浆小、无核仁淋巴细胞分型分裂相淋巴母细,方法：外周血淋巴细胞,+PHA,混匀，,37 72,小时取培养液涂片染色、镜检，分别计数转化细胞（淋巴母细胞、过渡型母细胞和有丝分裂相细胞）和成熟的淋巴细胞，共计数,200,个细胞。并计算转化率。,转化率,转化的淋巴细胞数,转化的淋巴细胞数,+,未转化的淋巴细胞数,100%,正常成人转化率为：,60%80%,，,50%,视为降低,方法：外周血淋巴细胞+PHA混匀，37 72小时取培养,形态学特点,1.,核的大小,2.,核与胞浆的比例,3,.,核的构造及有无核仁,淋巴细胞转化实验,形态学特点1.核的大小淋巴细胞转化实验,临床应用及意义,1.,用于结核病、慢性肝炎传染病的细胞免疫功能的测定,2.,肿瘤病人的疗效和预后,临床应用及意义1.用于结核病、慢性肝炎传染病的细胞免疫功能的,E,花环形成实验,（,Erythrocyte),检测人类外周血,T,细胞数量,的一种体外试验方法。,T,淋巴细胞表面具有绵羊红细胞受体（,CD2/LFA-2,），可吸附绵羊红细胞（,SRBC,）。,显微镜下可见以,T,细胞为中心，周围环绕绵羊红细胞（3个及以上），形似花环，即为,E,花环,。,一个,E,花环形成细胞即为一个,T,细胞,。,正常人外周血中,E,花环形成细胞约占淋巴细胞总数的,60,80,E花环形成实验（Erythrocyte)检测人类外周血T细胞,E,玫瑰花环实验（,Erythrocyte),T cell,CD2,（,SRBC receptor,）,E玫瑰花环实验（Erythrocyte)T cellCD2,医学微生物学微生物实验PPT免疫学实验三课件,结果判断及意义,结果判断：围绕,3,个绵羊红细胞为阳性,E,花环形成率,=,意义,：,花环形成的多少，可测知,T,细胞的数目，从而间接了解机体细胞免疫功能状态反映,E,花环形成阳性,T+E,花环形成阴性,T,E,花环形成阳性,T,100%,结果判断及意义结果判断：围绕3个绵羊红细胞为阳性E花环形成,临床应用：,1,、测定外周血中的,T,细胞数，观察受检者的细胞免疫功能及免疫增强剂的疗效；,2,、观察免疫抑制剂的效果，协助进行恶性肿瘤疗效的观察及预后判断等,临床应用：1、测定外周血中的T细胞数，观察受检者的细胞免疫功,血清学反应的分类（型）,（一）凝集反应,（二）沉淀反应,（三）补体结合试验,（四）中和反应,（五）免疫标记技术,血清学反应的分类（型）,（三）补体结合试验,两个系统,5,种成分,待检系统：,Ag+Ab+,补体,指示系统：,绵羊红细胞,(Ag),溶血素,(Ab),方法：,结果：,溶 血,阴性,不溶血,阳性,+,）,（,Ag(,未知,)+Ab(,已知,),+,补体,）,SRBC(Ag),溶血素,(Ab),（,原理,:,抗原抗体复合物能吸附并激活补体，使红细胞溶解，出现溶血现象。,（三）补体结合试验 两个系统 5种成分+）（A,Ag,Y,Y,Patients,serum,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Ag,No Ag,Ag,结果判定,溶 血,阴性,不溶血,阳性,AgYYPatients YYYYYYYYAgNo AgA,中和反应,病毒或毒素与相应的抗体结合后，失去对易感动物的致病力，谓之,中和实验,中和反应 病毒或毒素与相应的抗体结合后，失去对易感动物,中和反应,neutralization,在,活细胞或活体,内测定病毒被特异性抗体,中和,而,失去致病力,的试验。中和抗体与病毒结合后，使病毒失去对敏感细胞的感染能力，从而阻止病毒的繁殖,1,、病毒中和试验,中和反应 neutralization 在活细胞或活,细菌毒素与抗毒素中和试验。常见用于诊断风湿病抗“,O,”试验,。,2,、毒素中和试验,细菌毒素与抗毒素中和试验。常见用于诊断风湿病抗“O”试验。2,原理：,乙型溶血性链球菌能产生溶解人或动物红细胞的溶血素“,O”,，称为溶血毒素，它具有很强的抗原性，能刺激机体产生相应的抗体。当该毒素与相应抗体作用时，毒性被中和而失去溶血活性。,常用于,风湿病,辅助诊断,原理：,方法：,病人血清,+,链球菌溶血素,加,2%,的兔红细胞再次混匀,观察有无溶血,摇晃10分钟,37水浴45min取出放入冰箱30mi,n,阳性,+,阴性,-,方法：病人血清+链球菌溶血素摇晃10分钟37水浴45min取,免疫学标记技术,将已知抗体或抗原标记显示性物质，通过检测标记物，反映有无抗原抗体反应，从而间接测出微量的抗原或抗体,常用的标记物：,酶、荧光素,、放射性同位素、,胶体金,、生物素、电子致密物等。,免疫学标记技术,酶联免疫吸附试验（,ELISA,）,(,Enzyme linked lmmunosorbent Assay,),【,原理,】,把抗原抗体的免疫反应和酶（主要有,辣根过氧化物酶,、碱性磷酸酶等）的高效催化作用有机地结合起来，,并仍保持其免疫和酶的活性,。结合在抗原抗体复合物上的酶在遇到相应底物时，可以催化底物,水解、氧化或还原,，,从而产生有色物质,。颜色反应的深浅与抗体或抗原的量成正比。,【,方法,】,主要有间接法和双抗体夹心法。,酶联免疫吸附试验（ELISA）(Enzyme lin,医学微生物学微生物实验PPT免疫学实验三课件,医学微生物学微生物实验PPT免疫学实验三课件,免疫荧光技术（荧光抗体技术）,IFA,【,原理,】,将,荧光色素,（常用,异硫氰酸,荧光素，简称,FITC,）与特异性抗体（或抗原）以共价键基团牢固结合，但,不影响该血清抗体的免疫特性,。这种荧光标记的抗原抗体复合物，,可通过荧光灯源中产生的紫外光或蓝紫光激发产生荧光,，而用荧光显微镜加以观察。,具有,特异、敏感、快速,的特点。,【,方法,】,主要有直接法和间接法。,免疫荧光技术（荧光抗体技术）IFA【原理】将荧光色素（常用,医学微生物学微生物实验PPT免疫学实验三课件,医学微生物学微生物实验PPT免疫学实验三课件,免疫荧光,核均质型,核仁型,免疫荧光核均质型核仁型,免疫荧光,核膜型,免疫荧光核膜型,医学微生物学微生物实验PPT免疫学实验三课件,操作：胶体金法检测人尿液中绒毛膜促性腺激素（,HCG,）,HCG,（,绒毛膜促性腺激素,）是妇产科医生们所熟悉和最常使用的“妊娠试验”激素。它是由,和,二聚体的糖蛋白组成。但,-,亚单位为垂体前叶激素所共有。,-,亚单位是,HCG,所特异的。,操作：胶体金法检测人尿液中绒毛膜促性腺激素（HCG）HCG（,尿,-HCG,尿,-HCG,定性,：,孕妇,阳性,/,非孕妇女,阴性,尿,-HCG,（,HCG,半定量法）：,（清晨尿,HCG,水平最高，接近血清水平）,非孕妇女,5000IU/L,孕,60-70,天,(8-32),10,4,IU/L,。,正常妊娠期间血清,HCG,水平：,尿-HCG尿-HCG定性：孕妇阳性/非孕妇女阴性,原理,采用胶体金标记抗体，以硝酸纤维素膜为载体，使抗原抗体反应和洗涤在同一渗滤膜上，,反应后根据在膜上的颜色判断结果,。,以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔膜毛细管作用，使膜一端的液体慢慢向另一端渗移，犹如层析,原理采用胶体金标记抗体，以硝酸纤维素膜为载体，使抗原抗体反应,鼠抗人,HCG,单抗,胶体金颗粒,HCG,分子,胶体金标记鼠抗人,HCG,单抗,羊抗鼠,IgG,鼠抗人HCG单抗 胶体金颗粒 HCG分子胶体,HCG,阳性标本,尿中,HCG,与金标记的鼠抗人,HCG,单抗结合形成免疫复合物,在检测线未结合的,金标记鼠抗人,HCG,单抗,(IgG),随着尿液上行,到达,质控线,与,羊抗鼠,IgG,(,二抗,),结合而显色，作为质控对照。,随层析作用向上移动,至检测线与,鼠抗人,HCG,抗体,结合而聚集显色,positive,HCG 阳性标本尿中HCG与金标记的鼠抗人HCG单抗结合形,HCG,阴性标本,尿中,无HCG,与金标记的鼠抗人HCG单抗结合形成免疫复合物,在检测线未结合的,金标记鼠抗人,HCG,单抗,(IgG),随着尿液上行,到达,质控线,与,羊抗鼠,IgG,(,二抗,),结合而显色，作为质控对照。,随层析作用向上移动,至检测线与鼠抗人HCG抗体,不结合而不显色,negative,HCG 阴性标本尿中无HCG与金标记的鼠抗人HCG单抗结合,试纸条失效,金标鼠抗人,IgG,单抗随层析作用向上移动，到达,质控线,，,无,羊抗鼠IgG(二抗)或破坏失效，,不结合而 不显色,，作为质控对照。,失效,试纸条失效 金标鼠抗人IgG单抗随层析作用向上移动，到达质,医学微生物学微生物实验PPT免疫学实验三课件,医学微生物学微生物实验PPT免疫学实验三课件,临床,意义,应用,1,诊断早期妊娠,2,异常妊娠,3,流产诊断与治疗,4,先兆流产,5,肿瘤诊断与治疗监测,6.,葡萄胎、绒毛膜上皮癌,临床意义应用1诊断早期妊娠,器材：验孕试纸,/,人,标,1,、标,2,；阳性对照、阴性对照,方法：,1.,将试条有标志线的下端浸入尿液标本中，,深度到达且不可超过标志线,MAX,；,2.,约5秒后取出，平放，,5,分钟内观察结果,(,时间不能小于,5,分钟，也不能超过,15,分钟,),：两条红线为,(+),，提示尿中含,HCG,。一条红线为,(,一,),，表示不含,HCG,。,器材：验孕试纸/人,实验报告,胶体金法检测,HCG,原理、结果、作图、结论。,作图（示教）：淋转，花环,实验报告胶体金法检测HCG原理、结果、作图、结论。,