,基础自主回扣,高频考点突破,命题热点聚集,知能达标演练,课下定时作业,工具,栏目导引,选修1 专题2 微生物的培养与应用,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,专题2微生物的培养与应用,专题2微生物的培养与应用,判断下列说法是否正确：,1分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源(),2利用稀释涂布平板法只能分离微生物不能对微生物进行计数(),3消毒和灭菌实质是相同的(,),判断下列说法是否正确：,一、培养基及无菌技术,1种类：液体培养基、固体培养基。,2营养成分：一般都含有水、,、,、无机盐和生长因子。,3无菌技术,消毒方法：,、巴氏消毒法和化学药剂消毒。,灭菌法：灼热灭菌、干热灭菌、,灭菌。,碳源,氮源,煮沸消毒法,高压蒸汽,一、培养基及无菌技术碳源氮源煮沸消毒法高压蒸汽,二、微生物培养的基本技术,1配制培养基：称量,混合,溶化,调pH,分装,包扎。,2灭菌：加水,加培养基,密封,排冷气,维持压力,取出倒平板(或搁置斜面)。,二、微生物培养的基本技术,接种环、涂布器,平板划线,稀释涂布,接种环、涂布器 平板划线 稀释涂布,1.高温无菌的原理是什么？,提示：,高温可以使菌体细胞内的蛋白质、核酸变性失活，从而达到灭菌的目的。,2,用酒精消毒时，为什么70%的酒精杀菌效果最好？,提示：,浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌力减弱。,1.高温无菌的原理是什么？,三、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,1分离原理：土壤中细菌之所以能分解尿素，是由于它们能合成,，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起催化作用。,2统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用,法。,3实验流程：土壤取样,制备,微生物的培养与观察,细菌的计数。,脲酶,稀释涂布平板法、显微镜直接计数,稀释液,三、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数脲酶稀释涂布平板法、显微,刚果红,纤维二糖和葡萄糖,刚果红 纤维二糖和葡萄糖,3实验流程：土壤取样、,、梯度稀释、将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上、挑选产生,的菌落。,选择培养,透明圈,3实验流程：土壤取样、梯度,3.分离微生物的方法有哪些？,提示：,从混合样品中获得某种微生物的方法通常有两种：,(1)利用该分离对象对某一营养物质有,“,嗜好,”,的原理，专门在培养基中加入该营养物质，从而使它成为一种加富培养基。,(2)利用该分离对象对某种抑菌物质的抗性，在混合培养物中加入该抑制物，经培养后，原来占优势的微生物生长受抑制，而分离对象却可乘机大大增殖，在数量上占优势。,3.分离微生物的方法有哪些？,1微生物的营养：碳源、氮源、水、无机盐和生长因子。,2微生物培养的无菌技术,进行无菌操作主要是为了防止外来杂菌的入侵，重点是消毒和灭菌。,1微生物的营养：碳源、氮源、水、无机盐和生长因子。,三种常用灭菌方法的比较：,灭菌方法,适用材料,或用具,灭菌条件,灭菌时间,灼烧灭菌,接种环、接种针或其他金属工具,酒精灯火焰的充分燃烧层,直到烧红,干热灭菌,玻璃器皿(吸管培养皿)和金属用具等,干热灭菌箱内，160170,12 h,高压蒸,汽灭菌,培养基等,高压蒸汽灭菌锅内100 kPa,121,1530 min,三种常用灭菌方法的比较：灭菌方法适用材料灭菌条件灭菌时间灼,3微生物的纯化培养平板划线法与稀释涂布平板法,方法,平板划线法,稀释涂布平板法,注,意,事,项,(1)接种环的灼烧,第一次划线前：接种环上的微生物，避免污染培养物,每次划线前：杀死残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线末端,划线结束后：杀死残留菌种，避免污染环境和感染操作者,(1)稀释操作时：每支试管及其中的9 mL水、移液管等均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰1 cm2 cm处,3微生物的纯化培养平板划线法与稀释涂布平板法方法平板划线,方法,平板划线法,稀释涂布平板法,注,意,事,项,(2)灼烧接种环之后，要冷却后再进行操作，以免温度太高杀死菌种,(3)划线时最后一区域不要与第一区域相连,(4)划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破,(2)涂布平板时,涂布器用体积分数为70%酒精消毒，取出时，让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃,不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精,酒精灯与培养皿距离要合适，移液管管头不要接触任何物体,方法平板划线法稀释涂布平板法注(2)灼烧接种环之后，要冷却后,方法,平板划线法,稀释涂布平板法,目的,在培养基上形成由单个菌种繁殖而来的子细胞群体菌落,培养,平板冷凝后倒置培养，使培养基表面的水分更好地挥发，防止皿盖上水珠落入培养基造成污染,方法平板划线法稀释涂布平板法目的在培养基上形成由单个菌种繁殖,1下列关于微生物的培养与应用的叙述错误的是(),A通过消毒不能杀死物体内所有的微生物,B利用平板划线法可以统计样品中活菌的数目,C微生物所用的培养基的成分和植物组织培养所用的培养基的成分不同,D平板划线法和稀释涂布平板法常用于微生物的接种,1下列关于微生物的培养与应用的叙述错误的是(),解析：,消毒是指杀死部分对人体有害的病原微生物，但不一定能杀死细菌的芽孢，故A正确；统计样品中活菌的数目要用稀释涂布平板法，平板划线法办不到，故B错误；不同的培养对象，所需的营养成分不同，培养基中所加入的物质就不同，故C正确；微生物接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，故D正确。,答案：,B,解析：消毒是指杀死部分对人体有害的病原微生物，但不一定能杀,2如图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为12345。下列操作方法正确的是(),A操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌,B划线操作须在火焰上进行,C在5区域中才可以得到所需菌落,D在12345区域中划线前后都要对接种环灭菌,2如图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为12345。下列,解析：,本题考查平板划线操作方法。在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧，接种时划线操作是在火焰边进行。在5个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。,答案：,D,解析：本题考查平板划线操作方法。在每次划线前后都要对接种环,1筛选菌株,(1)原则：人为提供有利于目的菌生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物的生长。,1筛选菌株,(2)菌株筛选原理的比较,土壤中分解尿素的细菌,分解纤维素的微生物,常用选择培养基进行筛选，即提供有利于目的菌株生长的条件，如营养、温度、pH等，同时抑制其他微生物的生长,刚果红染色法，即在含有纤维素的培养基中，加入刚果红时，刚果红与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被分解后，该复合物不能形成，培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈,(2)菌株筛选原理的比较土壤中分解尿素的细菌分解纤维素的微生,2.统计菌落数目的方法,(1)显微镜直接计数法,原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。,方法：用计数板计数。,缺点：不能区分死菌与活菌。,2.统计菌落数目的方法,(2)间接计数法(活菌计数法),原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。,计算公式：每克样品中的菌株数(,C,V,),M,，其中，,C,代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，,V,代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，,M,代表稀释倍数。,操作：设置重复组，增强实验的说服力与准确性。同时为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数。,(2)间接计数法(活菌计数法),3.设置对照,(1)目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。,(2)方法：,证明培养基未被污染，用空白培养基作对照。,证明选择培养基的选择作用，用基础培养基接种等量同种菌液作对照。,3.设置对照,3分离纤维素分解菌的实验过程中，下列操作有误的是(),A经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上,B富集培养这一步可省略，但培养的纤维素分解菌少,C经稀释培养后，用刚果红染色,D对照组可用同样量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上,答案：,A,3分离纤维素分解菌的实验过程中，下列操作有误的是(),统计菌落数目的方法,(1)显微镜直接计数法,原理：利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；,方法：用计数板计数；,缺点：不能区分死菌与活菌。,统计菌落数目的方法,(2)间接计数法(活菌计数法),原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。,计算公式：每克样品中的菌数(CV),M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。,(2)间接计数法(活菌计数法),(2012西铁一中模拟)下列是关于,“,检测土壤中细菌总数,”,实验操作的叙述，其中错误的是(),A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板,B取10,4,、10,5,、10,6,倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上,C将实验组和对照组平板倒置，37,恒温培养2448小时,D确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数,(2012西铁一中模拟)下列是关于“,解析：,本题以,“,土壤中细菌的计数,”,为命题点，考查对基础知识的识记情况。为防止培养皿盖上凝结的水珠落在培养基表面造成杂菌污染，应将平板倒置。在细菌计数时，为保证实验结果的准确性，应至少涂布三个平板，选择菌落数在30300的平板进行计数；然后求出平均数，再根据对应的稀释度计算出样品中的细菌数。,答案：,D,解析：本题以“土壤中细菌的计数”为命题点，考查对基础知识的,1.(2012芜湖一中质检)在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应10,6,培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。产生A同学结果的原因可能有(),土样不同,培养基污染,操作失误,没有设置对照,A,B,C,D,答案：,A,1.(2012芜湖一中质检)在做分离分解尿素的细菌实验时，,消毒与灭菌的区别,灭菌方法,条件,结果,常用方法,消毒,较为温和的物理或化学方法,仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子),煮沸消毒法，还有化学药剂(如酒精、氯气、石炭酸等)消毒、紫外线消毒,灭菌,强烈的理化因素,杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子,灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌,消毒与灭菌的区别灭菌方法条件结果常用方法消毒较为温和的物理或,关于灭菌和消毒的理解不正确的是(),A灭菌是指杀灭环境中一切微生物的细胞、芽孢和孢子,B消毒和灭菌实质是相同的,C接种环用灼烧法灭菌,D常用灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等,关于灭菌和消毒的理解不正确,解析：,灭菌是指杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。,答案：,A,解析：灭菌是指杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。,2.细菌培养过程中，分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理方法，这些方法可依次用于消灭或杀灭哪些部位的杂菌(),A接种针、手、培养基,B培养基、手、接种针,C手、接种针、培养基,D培养基、接种针、手,答案：,B,2.细菌培养过程中，分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种,1用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时(),可以用相同的培养基,都需要使用接种针进行接种,都需要在火焰旁进行接种,都可以用来计数活菌,A,B,C,D,1用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时(),解析：,平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基；平板划线法采用接种针进行操作，而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作；纯化时，要进行无菌操作，需要在火焰旁接种，避免空气中的微生物混入培养基；平板划线法一般用于分离而不是计数。,答案